胸腺五肽治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的实验研究.pdfVIP

中文摘要 胸腺五肽治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的 实验研究 摘 要 目的： 多发性硬化(multiple nervous (central system，CNS)白质脱髓鞘病变为特点的自身 免疫性疾病。具有反复发作，部分患者病情呈进行性加重的 特点。由于MS发病率较高，呈慢性病程且倾向于青年人罹 患，使其成为重要的神经系统疾病之一。MS发病机制不确 切，尚缺乏行之有效的防治措施，因此通过建立动物模型， 探讨MS的发病机制，寻求有效的治疗方案，是我们目前研 究的主要方向。 的胸腺生成素II功能活性部分，胸腺生成素II由49个氨基 酸组成，而其中由5个氨基酸组成的肽链片段，有着与胸腺 生成素II相同的全部生理功能，所以就把这个五肽片段称为 胸腺五肽。在实验研究和临床应用中，胸腺五肽均显示出具 有调节免疫系统的作用，能诱导T淋巴细胞及其亚群分化和 成熟；减少自身抗体的产生；调节T淋巴亚群比例，使CD4+ ／CD8+趋于正常，免疫系统恢复正常。在某些自身免疫性疾 病(如类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮等)中疗效明显，长 期应用耐受良好。但目前国内外应用胸腺五肽治疗EAE／MS 尚未见报道。 本实验旨在MS的经典动物模型一实验性自身免疫性脑 中文摘要 autoimmune 脊髓炎(experimental 上，探讨不同剂量的胸腺五肽对EAE的治疗作用及其机制， 为脱髓鞘疾病的研究提供新的思路。 方法： 200 g，随机分为正常对照组6只，EAE模型组、地塞米松 (dexamethasone，DXM)组、TP．5小剂量组(O．05mg．kg以．d以)、 TP．5大剂量组(O．25 mg·kg～·d‘1)各18只。每组又随机分为 7天、14天、21天三个亚组，每亚组6只大鼠。 2模型制备：将新鲜豚鼠全脊髓制成匀浆，加上完全福氏佐 Freund’S 剂(completeadjuvant，CFA)，佐剂中含卡介苗4mg／ mL，经过乳化后经按O．4 mL／只分别于大鼠四肢足垫皮下注 射。药物治疗组于模型制备第一天起给予相应剂量腹腔注 射，药物每天一次持续给至动物处死时为止。 3神经功能评分：于免疫诱导当日及免疫后每天对动物的体 重变化、精神状态、活动情况进行观察，并对动物进行神经 功能评分，采用Kono等提出的标准，分为5分：1分动物尾 部无力；2分尾部无力+肢体无力；3分肢体轻度麻痹；4分 级肢体严重麻痹，被动翻身后不能复原；5分濒死状态。 4组织病理学：分别于免疫后第7天、14天、2l天，在动 物麻醉状态下，快速取其大脑侧脑室周围及颈、胸、腰膨大 处组织，40∥L多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，行HE染色， 光学纤维镜下观察炎症细胞浸润情况。 5RT．PCR法检测脑组织IFN吖、IL4mRNA的表达：实验动 物于免疫后第7天、14天、2l天，在麻醉状态下，快速取 大脑侧脑室周围及颈、胸、腰膨大处组织，液氮中保存，Trizol 中文摘要 一步法提取CNS组织总RNA，采用随机引物法进行逆转录 RT．PCR产物，以 反应后，扩增获得目的基因IFN吖、IL．4 p-actin作为内对照。最后紫外凝胶成像分析系统分析结果。 结果： 组之间的发病率没有统计学意义俨O．05)。 2行为学观察 2．1大鼠在发病潜伏期和缓解期时神经功能评分比较：各组 之间无明显差别。 2．2各组大鼠在发病高峰期时神经功能评分比较：TP．5小剂 量组、DXM组各大鼠神经功能评分明显低于EAE组及TP．5 别俨O．05)。 3组织病理学观察：在疾病早期，EAE鼠组织内即出现炎性 细胞浸润，且炎性细胞数目的多少与疾病严重程度相一致。 在发病高峰期和恢复期，TP．5小剂量组、DXM组炎症细胞 浸润形成的血管套袖数目明显低于EAE组及TP。5大剂量组 (