猪生长抑素Ⅱ型受体基因（SSTR2）shRNA的构建与筛选.pdfVIP

《 警 Onlinesystem：http：／w／ww．jabiotech．org 农鲤生糟接术学搬 农 业 生 物 技 术 学 报 JournalofAgriculturalBiotechnology 2012，20(4)：382～388 DOI：10．3969／j．issn．1674-7968．2012．04．006 研究报告 Letter 猪生长抑素 Ⅱ型受体基因(SSTR2)shRNA的构建与筛选 杨林 1,2 刘小龙 习欠云 江青艳 徐鹏如 张永亮 1广东省农、f动物基因组学与分子育种重点实验室，华南农、f人学动物科学学院，广州 510642；2广东省医学实验动物 中心，佛lfI528248 通讯作者 zhangyl@scau．edu．cn 摘 要 生长激素(GH)是调控动物生长的重要激素，GH分泌水平的高低主要受正性调控凶子生长激素释 放因子fGRF)和负性调控因子生长抑素(SS)的双向调节。SS通过生长抑素受体(somatostatinreceptor，SSTR) 发挥作用，减少GH的分泌水平。本研究设计了3条 SSTR2的短发夹RNA(shRNA)，构建猪(5 scrofa) SSTR2真核表达质粒(pcDNA3．1(．)．SSTR2)~HSSTR2慢病毒 RNA干扰质粒(pshRNA—copGFPlentivector， LV．shm~A)，并共转染中国仓 鼠 (Cricetulusgriseus)卵巢细胞系 (CliO)，通过对转染细胞的荧光观察、 Rea1．timePCR和酶联免疫法(ELISA)检测，结果表明，CHO转染细胞中猪 SSTR2mRNA表达水平不H程 度的抑制，分别为90．4％、28．3％~tl86．3％，(0．05)。其中，LV—shRNA1表现出最高的沉默效率：转染效率存 80％左右时，猪 SSTR2mRNA水平沉默效率为 9O．4％，蛋 白质水平降低 了33．3％。本研究成功地筛选到了 降低猪SSTR2基因表达的shRNA，为利用 shRNA技术下调动物基因表达，构建转基因模型提供思路。 关键词 RNAi，SSTR2，慢病毒载体，猪 ConstructionandSelectionofshRNA againstSomatostatinReceptor11 Gene(SSTR2)inSwine(Susscrofa) YANGLin， LIUXiao—Long XIQian—Yun JIANGQing—Yan XUPeng—Ru ZHANGYong—Liang 1GuangdongProvincialKeyLaboratoryofAgro—animalGenomicsandMolecularBreeding，CollegeofAnimalScience，SouthChinaAgricultural University，Guangzhou510642，China；2GuangdongM edicalLaboratoryAnimalCenter，Foshan528248，China Correspondingauthor，zhnagyl@scau．edu．on Abstract Growthhormone (GH、iSthemainhormonewhichCallcontrolthegrowthofanimals．GHreleaseiS controledbygrowthhormonereleasingfactor(GRF)nadsomatostatin(SS)．SSisoneofimportantnegativefactors regulating(mrelease，reducingsomatostatinreceptorU (SSTR2)expressiontherebydecreasedhteinhibitionof SS．Inthisstudy,Accordingtopig (Susscrofa)SS72genedepositedinGenBank，threeshort