转红色荧光蛋白基因唐鱼肌肉中抗生素标记基因（NPTⅡ）检测和表达量分析.pdfVIP

《 一 Onlinesystem：http：／w／ww．jabiotech．org 农韭熊铀技礴学辙 ． ． 农 业 生 物 技 术 学 报 JournalofAgriculturalBiotechnology 2012，20(4)：420425 !黑 DOI：10．3969／j．issn。1674-7968．2012．04．011 研究报告 Letter 转红色荧光蛋A基因唐鱼肌肉中抗生素标记基因(ⅣPTII)检测和表达量 分析 樊佳仕 [j俊杰 简清 于凌云 Il困水产科 研究院珠汀水产研究所 ／农、J部热带 峨 带水产资源利用与养殖重点实验窄，广州510380 通讯作者，jjbai@163．net 摘 要 为了获得有特色的观赏鱼，本实验室在 2003年将含有海葵红色荧光蛋 白基因的表达载体(I叫 含有标记基因新霉素磷酸转移酶基因(P 1I))转入唐鱼(Tanichthysalbonubes)的受精卵，获得转红色荧光 蛋 白基 因唐鱼 ，对其外源标记基因M叩Ⅱ的表达产物和存在时间进行分析 ，为 价转基 因鱼的生物安全 提供依据。本实验对转基因唐鱼和非转基因唐伍肌 肉中抗牛素标记基因(5／711进行PCR检测和M Ⅱ 表达产物的免疫检测试剂条检测，结果显示，转基因唐鱼检测到 P Ⅱ基因和表达产物， 非转基 牌值 中均没检测到该基因和表达产物存在 。同时在唐鱼死 后 (水温 20-25℃)，应用酶联免疫吸附测定 (ELISA)对死亡 0(鲜活肌 肉)、24、48、72、96、120和 144h组的转基因唐鱼肌 I^Jf11NPTII蛋 [j的含量进行 定量检测，结果表 明，转基凶唐鱼鲜活肌肉L}JNPTⅡ蛋 白在肌 肉中的含量为9．12ng／g，随着转基因唐伍死 亡时间增加肌 肉中NPTⅡ蛋 白含量逐渐减少，死亡96h组转基因唐龟肌 肉中NPTⅡ蛋 白已经接近为 0。 结果表明，转基因唐鱼肌肉llfJNPT1I蛋 白在 自然环境中容易降解 ，推测其对环境安全隐患相对较低。 关键词 转基因唐鱼，红色荧光蛋 白，新霉素磷酸转移酶，酶联免疫吸附测定 DetectionandExpressionAnalysisofNeomycinPhosphotransferaseII Gene(Ⅳj II)inMuscleofTransgenicTanichthysalbonubesExpressing theRedFluorescentProtein FANJia—Jia BAIJun—Jie JIANQing YULing—Yun PearlRiverFisheriesResearch Institute．ChineseAcademy ofFisherySciences／KeyLaboratory ofTropical SubtropicalFishery Resource Application Cultivation，MinistryofAgriculture，Guangzhou510380，China Correspondingauthor,jjbai@163．net Abstract Forornamentalpurpose，ourlaboratory chosefertilized eggofTanichthysdbonubesusedasa receptortotransferredfluorescentproteinvectorofseaanemonein2003．Transgenic albonubesexpressing theredfluorescentproteinwasobtained．Thispaperaimedatevaluating