蛋白质分离分析中的色谱技术新进展 - 中国现代应用药学.pdf

蛋白质分离分析中的色谱技术新进展 鲁碧楠，许丽娜，韩旭，彭金咏（大连医科大学药学院，辽宁 大连 １１６０４４） 摘要：蛋白质在食品、医药及生物等领域都有着重要的作用和广泛的应用，因此高效和高灵敏度的蛋白质分离分析成为现代 药物分析、分析化学及生命科学研究的热点。本文就现代色谱技术、色谱光谱联用技术、以及相关的集成化技术在蛋白分离 和分析中最新应用及进展作一简要的综述。 关键词：蛋白质分离；色谱技术；色谱联用 中图分类号：Ｒ９１７．１０１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００７７６９３（２００９）１３１１１６０６ ＲｅｃｅｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ  ＬＵＢｉｎａｎ，ＸＵＬｉｎａ，ＨＡＮＸｕ，ＰＥＮＧＪｉｎｙｏｎｇ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙｉｎＤａｌｉａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ１１６０４４，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｐｒｏｔｅｉｎｉｓｐｌａｙｉｎｇａｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｆｉｅｌｄｓｏｆｆｏｏｄ，ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｂｉｏｌｏｇｙｅｔａｌ，ｓｏｔｈｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｄａｎｄ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｂｅｃｏｍｅｔｈｅｈｏｔｓｐｏｔｉｎｍｏｒｄｅｎｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎａｌｙｔｉｃ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ．Ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｔｈｅｒｅｃｅｎｔａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｄｅｒｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｃｏｎｃｉｓｅｌｙ． ＫＥＹＷＯＲＤＳ：ｐｒｏｔｅｉｎｓｅｐａｒａｔｉｏｎ；ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ 　　蛋白质是生命有机体的主要成分，在生命生长 的不同，使其在两相中的分配不同而得以分离。低 发育的各个阶段都起着很重要的作用。同时，蛋白 ｐＨ值流动相、室温或较高的温度以及使用乙腈或异 质产品在食品、药品、医学诊断及生物催化等领域也 丙醇作为有机部分，三氟乙酸（ＴＦＡ）作为离子对试 有着广泛的应用。因此，进行蛋白的高效率和高灵 剂更有利于蛋白质的分离。蛋白质的保留指数和选 敏度的分离和分析研究是现代药物分析、分析化学 择性还与键合固定相的性质有关，大孔硅胶（２０～ 及生命科学研究的热点领域之一。 ３０ｎｍ）短链烷基（Ｃ和Ｃ）键合固定相适合于蛋白 ４ ８ 由于蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性功能等 质的分离；分子量相差较大和疏水性很强的蛋白质 特性不同，加上现代高新工程技术的发展，就为蛋白 混合物用无孔径载体柱分离效果很好，较高的柱温 质的分离和分析提供了多种方法。从传统的离心、 还能改善蛋白质混合物的分离。ＪａｎｉｎｅＢＭｉｌｌｓ等［１］ 沉淀、结晶方法，发展到双水相萃取、反胶团萃取、膜 利用反相高效液相色谱法一步纯化完整细胞中的重 分离以及色谱分离技术。近年来，一些新型的蛋白 ［２］ 组体蛋白；ＳａｎｄｒａＳａｎｔｉａｇｏＲｉｖａｓ等 利用高效液相 分离技术如蛋白质色谱、 ｎａｎｏ液相色谱等以及多种 色谱法分离纯化了蚌中的金属硫蛋白。 分离方法的集成联用正在不断涌现出来。本文就蛋 １．２　离子交换色谱（ＩｏｎＥｘｃｈａｎｇｅＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， 白质的现代分离分析技术作一简要的综述。 ［３４］ ＩＥＣ） １　现