甘蓝型油菜细胞核雄性不育的基因表达分析.pdfVIP

甘蓝型油菜细胞核雄I生不育的基因表达研究 专 业：作物遗传育种 研究方向：油菜分子生物学 研究生： 贺华良 导 师： 涂金星 植物在生长发育过程中，很多基因都有其特有的表达模式，在不同的生长环境 下，不同的组织或发育阶段，基因的表达水平都不一样。本文旨在通过对甘蓝型细 胞核雄性不育材料与雄性可育材料的对照分析，用cDNA—AFLP差异显示法找出二者 在花药临败育时期的差别表达基因，进一步研究差别育性基因对花药败育的影响； 同时参考拟南芥中己发表的育性相关基因，根据保守同源序列设计引物在甘蓝型油 菜中扩增问源基因，比较不育材料与可育材料序列之间的变异并做进一步的研究。 本研究对隐性核不育材料$45进行了差异显示研究，获得以下主要结果： 示技术运用于油菜育性机理研究。研究表明cDNA“FLP技术能够有效揭示核不育系 的可育株与不育株的差异表达，具有稳定性好、重复性高等优点。 2．揭示了不育系中可育株与不育株的三种基因表达差异。采用三组引物512种 引物对(2·162)进行AFLP扩增，分析表明，不同引物对扩增出的带纹数目不同，最多 可达70多条，平均每对引物可扩增出约40条清楚的带纹。根据差异带纹的有无及 强弱，可将其分成3类：(1)在细胞核雄性不育材料中没有而雄性可育材料中出现的 差异带；(2)在细胞核雄性不育材料中有而雄性可育材料不出现的差异带；(3)雄 性不育材料与雄性可育材料都出现但强弱不一致。这些丰富的多态性，对于分离与育 性相关的基因和研究育性转变机理十分有用。 3 性扩增的片段后有14个候选差异表达cDNA片段，其中8个为雄性可育材料出现的 差异带，另外6个雄性不育材料出现的差异带。 4．对14个候选差异表达cDNA片段进行了杂交筛选。14个差异片段经过反向 Northern Blot鉴定和NorthernBlot验证后，获得代号为1A一3、3B一2的两个阳性 mab一3相 片段。对阳性片段克隆测序分析表明，IA--3片段含有与Doublesex—and motif)高度同源的序列，DM域是转录因子调 关转录因子家族的DM域(DNA-binding 控动物精子发生的重要保守区域，推测油菜中含洲域的基因可能与花粉发育相关。 度同源，对此未知功能基因是否与败育相关需要进一步验证。 5．对油莱中与拟南芥MSl、MS2基因同源的基因进行了同源序列法研究。 华中农业大学硕士论文 贺华良 MSJBnap基因目前只获得5’端1755bp，在1755 bp序列中含有两个内含子。 6．对不育株和可育株的MS2Bnap基因序列分析表明，不育株与可育株的 MS2Bnap基因之间在五个位置上有单碱基差异，其中两个错义突变，三个无义突变。 不育株与可育株的脚励ap基因在第一个内含子有一个碱基的差异。MSlBnap、 gS2Bnap在不育株与可育株之间的差异以及与败育的可能相关性，需要进一步研究。 关键词： 甘蓝型油菜 核雄性不育 差异显示 同源序列法 2 Abstract of havetheir models Manygenes specialexpressionduringplant differenttissue or under developmental different should stages environments，genes atdifferentlevel．Inthis studiedthe