定向进化技术改良β2糖苷酶的低聚糖合成性能 - 河北科技大学.pdfVIP

Feb. 2006 生 物 加 工 过 程 第 4 卷第 1 期 　 ·　　　44 · Chinese Journal of Bioprocess Engineering 2006 年 2 月 β 定向进化技术改良 糖苷酶的低聚糖合成性能 冯惠勇 ,仪 　宏 ,王丽丽 (河北科技大学 　生物科学与工程学院 ,石家庄 050018) 摘 　要 :对携带糖苷酶基因pBBGly 的质粒 pBtac2 进行易错 PCR 定向进行研究 , 以改良其合成低聚糖催化性能 。来 β 源于 Thermus thermophilus 的耐高温 糖苷酶 ,通过一轮易错 PCR 随机突变和限制性酶切再连接介导的体外基因重 组 ,获得了两株高转糖基活性的突变酶 :N339TF401S 和 F401S 。它们能以天然糖类为糖基受体 ,低聚糖的合成得率 分别为 48 %和 62 % ,是野生型酶的6～8 倍 ,而底物的水解活力只有野生型酶的008 %和 13 % 。另外 ,在突变酶的 酶反应中 ,糖基受体对供体的水解反应有显著的促进作用 ,而野生型酶没有此特征 。并且它们的催化水解动力学 特征也明显区别于野生酶 ,水解反应初始浓度对速度关系呈一条直线 。 β 关键词 :定向进化 ; 糖苷酶 ;低聚糖 ;转糖基反应 ;水解反应 ( ) 中图分类号 :Q51 　　　　文献标识码 :A 　　　　文章编号 :1672 - 3678 2006 01 - 0044 - 06 Oligosaccharide synthesis performance of β Glycosidase promoted by directed evolution FENG Huiyong ,YI Hong ,WANGLili ( ) Institute of Bioscience and Biotechnology ,Hebei University of Science and Technology ,Shijiazhuang 050018 ,China Abstract :Dorected evolution was applied to ameliorate the expression vector pBtac 2 haboring wildtype ther β mostable glycosidase gene pBBGly. Through one run of random mutagenesis by error prone PCR and in vitro recombination by genetic engineering ,two mutants N339TF401S and F401S which posses high transferasees ac tivities were obtained. They could use natural di