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维普资讯 164 · 组织工程 · f 肌腱细胞类胰岛素生长因子．1受体密度分 2产； 杨志明 项 舟． 邹立 彭文垆 魏大鹏， 摘 要 为了了解类胰岛素生长因子一lfICcF-1)受体在不同代次体外培养的肌腱细胞的分 布，同时观察同一肌腱细胞周期中不同亚时相的IGF-1受体数 目的差别，采用免疫组化和藏式细胞 仪分析法，对体外培养的原代、第 6代和第 13代肌腱细胞的IGF-I受体密度进行了分析，井以第 6 代肌腱细胞为对象，进行 了同一细胞周期不同亚时相的 IGF-1受体数 目差别分析。结果表明， IGF-1受体在体外培养的原代、第 6代和第 l3代肌腱细胞的密度大体相同，而在同一细胞周期中分 裂前期及分裂期(G2M期)的受体数 日比I)NA合成前期(Gl期)的受体数 目多 (P0．O1)。提示，在 肌腱细胞培养的传代过程中和在同一细胞周期的不同亚时相，肌腱细胞均维持一个相对稳定的 IGF-I受体密度。为组织工程人工肌腱的构建和肌腱细胞生长的调控提供了理论基础。 关键词 类胰岛素生长因子．1 受体密度 肌腱细胞 流式细胞仪 工GrF—f —— —— 在肌腱细胞 的培养中，我们发现从原代 细胞传代到第 l3代，肌腱细胞的增殖能力就 1 材料与方法 变得十分低下，这种增殖能力的低下又能通 1．1 材料来源 肌腱取 自水囊引产的5月龄胎儿四肢。F．12培 过增加外源性类胰 岛素生长因子．1(insulin． 养基系 Sigma公司产品。新生小牛血清 ( s)系华 1ike faett~-1，IGF．1)得到部分补偿…。 西医科大学分子生物学研究室产品，经灭活过滤除 这一效应的产生除了外源性加入 IGF．1因子 苗及去支原体处理。IGF-I系 BoehrlngerMannheim 外，细胞对该因子的响应是促成该效应的另 Biochexaica产 品。IGF-I受 体 的 鼠单 克 隆抗 体 一 个重要方面。许多对 IGF．1因子进行深入 (ICcF-1Rn)系S帅 CruzBioteehnology，lnc．产品。 研究的报道都指出，IGF-1的效应是通过模受 1．2 肌腱细胞的培养 体 一配体模式产生的 ．即对 IGF．1产生生 按 Handel~n…分步酶消化法分离人胚腱细胞。 物效应的细胞都应该有 IGF．1受体。因此， 首先在手术放大镜下剪除肌腱外膜组织，Hank’s液 肌腱细胞也具有这一受体。那么，IGF．1受体 洗涤3次，用O．25％胰蛋白酶及01％胶原酶将整段 在肌腱细胞的分布如何，不同代次细胞之间 肌腱在 37℃消化 ∞ 分钟，再次用 Hank’s液洗涤 3 次。将余下的腱段剪成 1皿 ～2皿 碎块，再用上 受体密度有无改变，是否与肌腱细胞经多次 述浓度的胰蛋白酶及胶原酶混合液在 卯℃消化 1小 传代后的繁殖能力低下有关?为了回答这些 时，用新生小牛血清终止消化后过滤去除碎块，滤液 问题．我们采用免疫组化与流式细胞技术定