链霉菌zxy19木聚糖酶酶学性质及酶基因克隆.pdfVIP

微 生物学通报 NOV20，2008，35(11)：1681~1685 M icrobiology @ 2008byInstituteofM icrobiology．CAS tongbao@ im．ac．cn 链霉菌zxy19木聚糖酶酶学 性质及酶基因克隆 王 吟1,2杨艳燕 肖 静 徐 俊 (1．国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室 厦门 361005) (2．湖北大学生命科学学院 应用生化研究室 武汉 430062) 摘 要：采用平板筛选法，从红树林放线菌中筛选到一株有较强木聚糖酶活的菌株 zxyl9，其 16S rDNA序列与 Streptomycessampsonii的同源性仅为 96％。该菌株木聚糖酶活为 852．41IU，mL，酶 反应最适 pH值为 7，最适反应温度为 60。C。用针对木聚糖酶基因保守结构域的一对简并引物扩 增到该酶基因部分序列，进而通过反向 PCR扩增到了完整的酶基因。对该基因序列分析结果表明 此木聚糖酶基因属于糖基水解酶家族 11的成员，酶蛋 白氨基酸序列与 已报道序列同源性最高为 79％(StreptomyceslividansxylanaseB)。构建了该酶重组表达质粒pET-28a—xy1696，经过 IPTG诱导 实现了该酶蛋 白在大肠杆菌 BL21(DE3)中的异源表达，且通过镍柱纯化后的表达产物具有生物学 活性 。 关键词：红树林，链霉菌，木聚糖酶，异源表达 TheXylanasePropertiesandtheXylanase GeneofStreptomycessp．zxyl9 WANGYin’。 YAN GYan．Yan2 XIAOJing XU Jun (1．TheThirdInstituteofOceanography，StateOceanicAdministration，Xiamen361005) (2．CollegeDL ScienceHubeiUniversity，Wuhan430062) Abstract：A mangroveactinomycetesstrainzxyl9thathasshowns~ongxylanaseactivitywasselectedby platescreening．SequencinganalysisandBlastsearchofthe16SrDNA geneofhtestrainrevealedhtathte highestidentityinhtedatabasewas96％ againstStreptomycessampsonii．Chraacterizationofhtexylanase enzymaticpropertiesofzxyl9hasshownhtathteoptimalpHwas7andhteoptimaltemperaturewas60。C． Degenerateprimersweredesignedaccordingtohteconservativedomainsofactinomycetalxylanasetoa／n— plify htepartialxylanasegene．Thecompleteenzymegenexy1696wasobtainedbyinversePCR subse— quentlyandconfirmedbyDNA sequencena alysis．Blastserachofhtetranslatedaminoacidsequencesug‘ gested htathteenzymebelongstohteglycosylhydrolasesfamily 11wiht htehighestsimilarityas79％ againsthtexyl