论述农药的代谢.pptVIP

葡萄糖转移酶参与的代谢反应 氯黄隆chlorsulfuron 氯黄隆在小麦、大麦中降解快，而在大豆、甜菜等敏感作物中降解慢。 * 葡萄糖转移酶参与的代谢反应 氯苯甲醚chloroneb * MFO与抗药性的关系 家蝇CYP6A1能够将艾氏剂和氯丹分别氧化为狄氏剂和环氧化氯丹 。 重组杆状病毒感染的鳞翅目细胞系统中表达的CYP6A2除了能够将艾氏剂和氯丹氧化相应的环氧化物，还能通过脱硫作用和氧化酯解作用分别将有机磷杀虫剂二嗪磷diazinon代谢为diazoxon和2－异丙基－4甲基－6羟基嘧啶。 果蝇CYP4E2基因在DDT抗性品系中高效表达 CYP6D1mRNA的高效表达与家蝇对二氯苯醚菊酯的抗性有关 （朱礼华等，2000） * CYP4mRNA的高效表达与淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性有关 （朱昌亮等，2001） * MFO的检测 P450含量测定 底物氧化法 mRNA含量测定 * P450含量测定 特征光谱：还原性P450与CO结合后在450nm处有最大吸收峰 在加有适量连二亚硫酸钠的试管里，加入微粒体悬液，混匀，通CO气体1min，在分光光度计上400~500 nm 范围进行扫描。计算公式为P450=(A450一A490)／(91×Pr)×1 000(nmol／mg蛋白)，其中91为吸光系数，Pr为蛋白质浓度(mg／mL) （严敏芬等，2006） * 底物氧化法 7-乙氧基异吩恶唑 ——7-乙氧基异吩恶唑0-脱乙基酶（EROD） 7-乙氧基豆香素 ——7-乙氧基豆香素0-脱乙基酶（ECOD） 苯并芘B[a]P ——芳基羟化酶(AHH) 艾氏剂 ——环氧化酶 * 芳香基羟基化酶（aryl hydroxylase，AHH） 刘永杰 等 （ 2005）以苯并芘为底物得抗氯氟氰菊酯的甜菜夜蛾品系中肠微粒体AHH比敏感品系高1.51倍 * O-烷基羟基化酶 用对硝基苯甲醚，又称对硝基茴香醚（p-nitroanisole, PNA）为底物。反应生成的对硝基酚在碱性条件下呈黄色，在400nm波长下比色： * N-烷基羟基化酶 以对氯-N-甲基苯胺为底物，每5毫升的反应体系中加入3μmol。用含6%对二甲基氨基苯甲醛的3mol/L硫酸溶液中止反应，在387纳米波长下比色： * 环氧化酶 用艾氏剂作底物，由气相色谱法检测（刘永杰 等，2005）。 * 测定MFO较为灵敏的方法，是以7-乙氧基异吩恶唑或7-乙氧基豆香素作底物，以荧光法测定酶的脱O-烷基（EROD，ECOD）活性。 测定EROD活性的反应体系中，7-乙氧基异吩恶唑的添加量只需要1μmol/L, 用对硝基苯甲醚和对氯-N-甲基苯胺作底物时，底物添加量分别需达到800μmol/L和600μmol/L。 以荧光法测定EROD活性时，取激发波长537纳米，发射波长为583纳米。 EROD * 酶源和辅基 MFO的催化反应需要还原型辅酶II（NADPH）的参与 可直接使用NADPH，也可以用NADP、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶组成的NADPH生成系统作辅酶。 检测MFO的催化反应多以微粒体作为酶源 * EROD CYP1A1 MROD CYP1A2 PROD CYP2B1/2B2 ethoxyresorufin methoxyresorufin pentoxyresorufin * 酯酶 羧酸酯酶（B-酯酶 ，EC 3.1.1.1 ）——马拉硫磷 * 芳基二烷基磷酸酯酶（A-酯酶 ，EC 3.1.8.1 ，对氧磷酶 ） * 酯酶在害虫有机磷的抗性中起着极为重要的作用，在对氨基甲酸酯和拟除虫菊酯的抗性中也起一定作用。 酯酶在抗性机制中具有两个作用 通过水解作用产生无毒代谢产物 结合作用杀虫剂，形成磷酰化酶或氨基甲酰化酶，使杀虫剂不能到达靶标。 两者均能起到保护体内靶标－乙酰胆碱酯酶免受抑制。 酯酶与抗药性 * 酯酶参与的代谢反应 酰胺（水解）酶——乐果 * 芳基酰胺（水解）酶——敌稗 * 环杨化物水解酶——西维因 * 酯酶的检测 酯酶可水解α-醋酸萘酯为醋酸和α-萘酚。后者与固蓝B盐反应生成一个蓝紫色物质（λ=550～600纳米nm）。 酯酶的检测也可以用β-醋酸萘酯作底物，产物呈紫红色。 pH对显色反应有很大影响。 染液中可加入4~5%的SDS，一来增色，二来终止反应。 * α-和β-醋酸萘酯为非特异性底物，检测昆虫酯酶时，可在反应体系中加入10-7 mol/L左右的毒扁豆碱，以消除胆碱酯酶的活性 。 毒扁豆碱不能排除其它酯酶，如A-酯酶的活性。 所幸A-酯酶一般只存在于哺乳动物体内。 * 谷光甘肽-s-转移酶（ GST ） 根据底物的不同， GST （EC 2.5.1.18 ）又可以分为谷胱甘肽-S-烷基转移酶、谷胱甘肽-