补肾对超排卵周期颗粒细胞GDNF、GFR_α-1表达的作用.pdf

提 要 目的：观察补肾中药对超排卵周期颗粒细胞胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF ）、GDNF 家族特异性受体 -1 （GDNF family  receptor -1，GFR-1 ）的影响，从卵母细胞生殖泡裂解、第一极体的排出及其成熟 旁分泌调节的角度，探讨补肾改善卵母细胞质量，提高控制性超排卵妊娠结局的机制。 方法：临床研究：将 80 例因输卵管因素行体外受精－胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET ）的患者按照随机数字表法分为治疗组40 例（二 至天癸颗粒联合促性腺激素（Gn ），40 个周期）和对照组 40 例（安慰剂颗粒联合 Gn， 40 个周期）。采用 IVF-ET 治疗中目前常规应用的控制性超排卵方案，治疗组在 IVF 治疗周期加用二至天癸颗粒；对照组则加用安慰剂颗粒。观察临床肾虚证候积分变化 情况，Gn 用量及用药天数，取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率 及颗粒细胞 GDNF 、GFR-1mRNA 的表达情况。同时行颗粒细胞体外培养24h 、48h 后观察 E 、P 的分泌情况以了解颗粒细胞的分泌功能。 2 实验研究：将 165 只 8-9 周龄、健康昆明种雌性小鼠按照随机法分为空白组、治 疗组及对照组，每组各 55 只。治疗组及对照组进行控制性超排卵，连续灌胃给药（治 疗组用二至天癸颗粒，对照组用等量生理盐水），三组又各分为 1、2 两组。1 组 50 只脱颈处死小鼠，取生发泡(GV)期裸卵(DOs),观察生殖泡破裂（GVBD ）和第一极 体（PB1 ）释放；之后成熟卵母细胞行GDNF、GFR-1mRNA 的表达检测；2组各5 只雌雄鼠合笼饲养，取受精卵，观察卵裂率、成胚率。 结果：临床研究：治疗组患者肾虚症状得到明显改善，治疗组Gn用量及用药天 数均低于对照组，单个卵雌激素（E2/卵泡）水平高于对照组，优质卵率、优质胚胎 率及临床妊娠率均高于对照组，差异均有统计学意义（P ＜0.05 ）；治疗组颗粒细胞培 养24h 、48h生长情况，培养24h 、48h后收集的培养液E2 、P检测及颗粒细胞 GDNF 、 GFR-1mRNA表达均优于对照组，差异均有统计学意义(P ＜0.05) 。实验研究：治疗 组GV期卵母细胞GVBD率、PB1排出率均高于对照组，差异有统计学意义 （P＜0.05）； 各组小鼠受精卵卵裂率及成胚率比较，对照组低于空白组，治疗组高于对照组，差异 有统计学意义（P ＜0.05 ）。治疗组卵母细胞GFR-1mRNA 的表达高于对照组，差异 有统计学意义(P ＜0.05) 。 结论：1.获得与既往国家级和省级课题相同的临床妊娠率（54%左右）。在 IVF-ET 治疗周期，应用补肾中药可明显改善患者肾虚症状，减少 Gn 用量，提高优质卵率、 优质胚胎率，进而改善临床妊娠率，是临床常用的有效药物。2.补肾中药提高颗粒细 胞 GDNF、GFR-1mRNA 的表达，改善颗粒细胞分泌功能，这可能是补肾中药改善 IVF 结局的机制之一。3.补肾中药促进小鼠 GV 期卵母细胞生殖泡的破裂（GVBD ） 和第一极体（PB1 ）的排出；提高小鼠卵母细胞GFR-1mRNA 的表达，并改善了小 鼠受精卵的卵裂、形成囊胚的能力。推断：补肾中药提高颗粒细胞 GDNF、GFR-1mRNA 的表达，提高小鼠卵母细胞 GFR-1mRNA 的表达，促进卵母细胞 GVBD 和 PB 1 的 排出，从而改善了卵母细胞成熟度，提高卵细胞质量，从而提高胚胎质量及临床妊娠 率。这可能又是补肾中药改善 IVF 结局的机制之一。 关键词 补肾；肾主生殖；控制性超排卵；颗粒细胞 GDNF 、GFR-1mRNA 1 Effects of Reinforcing Kidney on the Expression of GDNF、GFR-l in Granulosa Cell of Superov