血清蛋白的直接化学发光成像分析方法分析.pdfVIP

北京师范大学硕士论文 摘要 ≯s3733主 本文建立了聚丙烯酰胺凝胶皂泳一化学发光成像技术检测血湾蛋白的方法。主要研究了血清中 电泳及化学发光成像的条件。 利用本方法，可以成功地检测到不同类型的结合珠蛋白，并对其多态性进行研究。由于结合 诺，过氧化氢发光体系，园此在实验过程中。可弘用血红蛋自作为探针，将不同人的血靖进行电泳 分离，然后用化学发光成像法检测。同时还研究了cu“、z一、Nr、M矿等不同金属离子对于 此检测体系的增敏作用，发现这些离子对于该体系都有不同程度的增敏作用，而且cu”对于蛋白 谱带的位置影响也很大。我们还尝试了Ti02纳米粒子、碳纳米管、聚苯乙烯纳米粒子对于血清蛋 白聚丙烯酰胺凝胶电泳行为及化学发光成像行为的影响。由于白蛋白也可以与血红蛋白形成 Hb-HSA配合物。而且此配合物对于鲁米诺一过氧化氢化学发光体系的催饨作用远远强于血红蛋白 本身，因此用本方法可以很灵敏地检测到白蛋白的存在，开辟了一条检测人血清白蛋白的新途径。 我们还研究了金属离子与白蛋白形成的M”-lISA二元配合物及M”．HSA．Hb三元配合物对于鲁 米诺-过氧化氢化学发光体系的催化作用，其中c02+增敏作用比较强；其他离子对于后者有增敏 作用，对于前者增敏作用不明显。此方法不但建立了新的检测人血清白蛋白的方法，而且可以反 过来利用自蛋白对于血红蛋白的增敏作用，用白蛋白来检测痕量的血红蛋白，同时在血红蛋白和 白蛋白复合物中可以加入金属离子进一步增敏。 本文在最佳条件下，尝试了本方法在定量方面的应用，测锝结合珠蛋白和白蛋白的检测限分 别是0．25 gtg·mL．1和O．15 gtg·mL一，比传统的考马斯亮蓝R250灵敏度提高了十几倍。同时分析 速度提高了近一百倍。本方法是一种灵敏度高、简单快速、背景低的检溺方法，而且设备简单， 很容易在一般生化实验室普及， 本文还进行了手性商效液相色谱法拆分弘阻滞jf!}类药物对映异构体钓研究，在酰胺型手性固 定相上直接拆分了美托洛尔和比索洛尔的对映体，优化了拆分条件，讨论7Z元流动相中1．2．二 氯乙烷和甲醇含量对丁1分离的影响，并研究了温度和流速对于分离的影响。对于美托洛尔对映体， 论了拆分机理。 关键词： 化学发先成像，聚丙烯酰胺凝胶电泳，结令珠蛋自，自蛋白，血红蛋白；手性拆分，Pirk[e 型手性固定相，美托洛尔。比索洛尔，高效液相色谱 北京师范大学硕士论文 Abstract Inthis novel method in thesis，a chemiluminescent(CL)imagedirectlydetectingproteins method after is offersthe of and proposed．111is advantage gels electrophoresis quick polyacrylamide sensitive withtraditionalCoomassiebrilliantblue procedurescompared forill inhumanserumcould with method．Several could proteins complexesheineglobin，which and