双歧杆菌对中国对虾原肌球蛋白致敏小鼠的免疫调控作用.pdfVIP

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2017, 57(7): 1026-1037 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Article 研究报告 双歧杆菌对中国对虾原肌球蛋白致敏小鼠的免疫调控作用 彭吉祥，王彦波，傅玲琳* 浙江工商大学食品与生物工程学院，浙江省食品微生物技术研究重点实验室，浙江 杭州 310018 摘要： 【目的】比较研究婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis 13.085)对中国对虾原肌球蛋白致敏 BALB/c 小鼠预防与治疗过敏反应的差异，探究其对致敏小鼠 Treg/Th17 细胞平衡及相关细胞因子的 影响。【方法】采用硫酸铵盐析及等电点沉淀法纯化中国对虾原肌球蛋白(TM) ，将中国对虾 TM 和弗氏 佐剂混合液腹腔注射诱发 BALB/c 小鼠致敏，建立动物过敏模型。将实验小鼠随机分为正常对照组、治 疗对照组、双歧杆菌治疗组、预防对照组和双歧杆菌预防组。观察分析小鼠过敏症状(腹泻、肺组织 HE 染色比较、称重法测定小鼠体重和脾脏脏器系数变化) ，采用 ELISA 测定小鼠血清中特异性 IgE 、IgG2a 和组胺的含量，采用流式细胞术测定脾脏 T 淋巴细胞亚群(Treg、Th17)数量，采用荧光定量 PCR 测定 脾脏中 Treg 型和 Th17 型细胞因子和转录因子的表达量。【结果】纯化得到中国对虾原肌球蛋白纯度为 84.93% ，得率为 60.88%。体内试验表明，双歧杆菌治疗组和预防组相比于对照组，腹泻和过敏症状均 有明显的缓解；不同时期的双歧杆菌干预均对过敏小鼠肺组织症状有明显的改善作用，且可降低过敏小 鼠的脾脏脏器系数。第 56 天实验周期结束后发现，相比预防对照组和治疗对照组，双歧杆菌预防组和 治疗组小鼠血清中特异性 IgE 和组胺含量显著降低(P0.05) ，脾脏 Treg/Th17 比值显著升高(P0.05) ，Th17 型细胞因子 IL-17A mRNA 表达水平显著降低(P0.01) ；双歧杆菌治疗组相对于治疗对照组，Treg 型细 胞因子 CD25 mRNA 表达水平显著升高(P0.01) 。此外，双歧杆菌治疗组血清特异性 IgE 及 IL-17A mRNA 转录水平显著低于双歧杆菌预防组(P0.05) ，而 Treg/Th17 比值及 CD25 mRNA 转录水平显著高于预防 组(P0.05) 。【结论 】 双歧杆菌 13.085 能有效缓解小鼠过敏症状，且治疗免疫调控效果优于预防效果， 其作用可能通过平衡 Treg/Th17 细胞亚群数量，促进 Treg 型细胞因子表达而抑制 Th17 型细胞因子分泌， 从而阻断炎性抗体及组胺释放。 关键词：中国对虾原肌球蛋白，双歧杆菌，过敏，免疫调控 食物过敏已成为全球广泛关注的食品安全问 产品由于其味道鲜美且营养丰富而深受消费者的 题之一，其发生率逐年上升。虾、蟹等甲壳类水 喜爱，虾类富含原肌球蛋白(Tropomyosin ，TM) 、 基金项目：国家自然科学基金 ；浙江省自然科学基金(LY14C200001) *通信作者。Tel ：+86-571；E-mail ：fulinglin@ 收稿日期：2016-10-03 ；修回日期：2016-11-04 ；网络出版日期：2016-11-29 彭吉祥等 | 微生物学报, 2017, 57(7) 1027 精氨酸激酶(Arginine kinase ，AK)和肌球蛋白轻链 1 材料和方法 (Myosin light chain ，MLC)等过敏原，具有很强的 致敏性[1] 。其中，原肌球蛋白是一种过敏性糖蛋白， 1.1 材料 分子量为 35–40 kDa ，主要通过诱导 IgE 抗体介导 1.1.1 实验菌株：婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium 的 Ⅰ型超敏反应，引起机体强烈的过敏反应[2] 。过 infantis 13.085) 由浙江省食品微生物技术研究重 去的研究多认