plga支架降解对血管化功能影响的体外研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（７）：１６１９ ＰＬＧＡ支架降解对血管化功能影响的体外研究  武延格　孙学峰　杨　林 　王　正 （暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院　深圳　５１８０２０） 摘要　目的：研究聚乳酸羟基乙酸 （ＰＬＧＡ）支架材料降解产物对血管内皮细胞增殖、迁移和小 管样结构形成的影响。方法：将ＰＬＧＡ支架材料放入磷酸盐缓冲液 （ＰＢＳ）中体外无菌降解１、２、４ 周。用降解液处理人脐静脉内皮细胞株ＨＵＶＥＣ，采用ＢｒｄｕＥＬＩＳＡ法、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室法和小管形 成实验检测ＰＬＧＡ支架材料降解液对血管内皮细胞增殖、迁移和小管样结构形成的影响。结果： ＰＬＧＡ支架材料１周降解液对内皮细胞的迁移和小管形成无明显影响，对内皮细胞增殖有一定的 促进作用。随着降解时间的延长，２周降解液抑制内皮细胞的迁移和小管形成，４周的降解液对内 皮细胞增殖、迁移和小管形成均有抑制作用。结论：ＰＬＧＡ支架材料降解初期有对血管内皮细胞 的增殖有促进作用，降解后期可能由于降解过程中产生的酸性物质累积增多，影响了血管内皮细 胞的生长和功能，从而抑制新生血管的形成。 关键词　ＰＬＧＡ　降解　血管化功能 中图分类号　Ｑ２ 　　组织工程人工器官植入体内的血运再生和营养支 物公司）；磷酸盐缓冲液 （ＰＢＳ，自配）；ＢｒｄｕＥＬＩＳＡ试剂 持是组织工程取得成功的关键。组织体外培养环境 盒 （５溴脱氧尿嘧啶核苷 Ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｄｉｎｅ，Ｒｏｃｈ，美 中，其营养供应源于与培养液的渗透交换，体内植入后 国）；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ培养小室 （微孔滤膜孔径８（ｍ，Ｃｏｒｎｉｎｇ 应由宿主的血液微循环供应，迅速过渡到宿主移植物 公司，美国）；Ｍａｔｒｉｇｅｌ基质胶 （ＢＤ公司，美国）；ｐＨ计 再生血管网供应营养成分。能否迅速完成血管再生， （Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司，德国）；ＢＩＯＲＡＤ６８０型酶标仪 （ＢＩＯ 对于较大体积的组织工程人工器官尤为重要。 ＲＡＤ公司，美国）。 　　聚乳酸 （ＰＬＡ）和聚乙醇酸 （ＰＧＡ）的共聚物 １．２　方　法 ［１２］ １．２．１　ＰＬＧＡ材料体外降解　将 ＰＬＧＡ材料（质量约 ＰＬＧＡ是组织工程常用的聚合物材料 ，具有良好的 生物相容性和生物可降解性且降解速度可控。有关 ０．１ｇ）完全浸泡在１５ｍｌＰＢＳ溶液 （ｐＨ＝７．２）中，放入 ＰＬＧＡ的降解研究报道较多，而其降解对血管化的影响 ３７℃恒温箱内进行水解且３天更换溶液。于１、２、４周 研究未见相关报道。因此，本文研究了可降解组织工 后取出材料，抽取材料降解液，测定ｐＨ值，留取材料降 程支架材料ＰＬＧＡ体外降解与血管化功能之间的关系， 解液备用。 ３ 寻找影响血管化的因素，为组织工程支架材料的选择 １．２．２　血管内皮细胞增殖试验　以细胞数２×１０个／ 孔内皮细胞悬液接种于９６孔板，每孔 １００ｌ，２４ｈ后每 提供依据。 μ 孔再加入１００ｌ不同时间点材料降解液，继续培养２４ μ １　材料与方法 小时。按照ＢｒｄｕＥＬＩＳＡ试剂盒的操作说明处理细胞， １．１　材　料