姜黄素酯化物对肝癌细胞LDL受体表达的影响.pdfVIP

2008年 11月 中成 药 November2008 第30卷 第 11期 ChineseTraditionalPatentMedicine Vol_30 No．11 姜黄素酯化物对肝癌细胞 LDL受体表达的影响 黄燕芬， 洪行球 (浙江中医药大学生命科学学院，浙江杭州310053) 关键词：姜黄素酯化物；肝癌细胞；低密度脂蛋 白受体 丰图分类号：R285．6 文献标识码 ：B 文章编号：1001—1528(2008)11-1691-02 姜黄素是姜黄属姜黄根茎中的主要活性成分，具有抗氧 1．2．3 显微荧光检测姜黄素酯化物对肝癌细胞 LDL-R的 化，抗炎，降血脂作用 ，可影响肿瘤发生和血脂代谢的各个阶 表达 段。姜黄素水溶性差 ，在体外容易被氧化，口服给药的姜黄 用含 10％FBS的RPMI1640培养的肝癌细胞以2mL／~L 素在胃肠道内被代谢口]。为此 ，用丁二酸酐酯化姜黄素， 接种于放有载玻片的6孔板 ，每孔分别加入浓度为20bLmol／ 目的是不改变姜黄素母核结构增强水溶性，考察其对 HpG： L的姜黄素、姜黄素酯化物，每个样品加两孑L，余孔加等量的 细胞表面LDL．R表达的影响，比较姜黄素酯化物和姜黄素 DMSO培养液，37℃，5％CO2培养箱培养24h后，更换培养 在降血脂功效上的强弱。 液(不含小牛血清的1640培养液)加入荧光(DiI)标记过的 1 材料和方法 LDL，继续培养24h，荧光显微镜下观察 LDL受体表达情况。 1．1 材料 ． 1．2．4 流式细胞仪检测姜黄素酯化物对肝癌细胞 LDL—R 姜黄素(浙江中医药大学植物化学室制备 ，纯度98％以 的表达 上)，姜黄素酯化物 (浙江中医药大学植物化学室制备，纯度 肝癌细胞以6．0×10／mL接种于25mL培养瓶，每瓶4 91．2％以上)，流式细胞仪 (FCM)(美国BD公司FACSort) mL，37℃、5％CO 培养，待细胞贴壁后随机分7组：正常对 肝癌细胞 (HpG) 照组含 10％小牛血清 RPMI1640培养液；姜黄素，姜黄素酯 1．2 方法 化物各3个剂量组。37℃、5％CO 培养48h，弃培养液后加 1．2．1 姜黄素酯化物对OX—LDL促牛VSMC增殖的影响 入含DiI-LDL(20wg／L)的无小牛血清的RPMI1640培养液， 取生长良好的VSMC以 10 一10／mL种于96孔培养 37oC、5％CO2培养4．5h，4oC继续培养0．5h，胰酶消化后 板，每孔 100 ，37oC、5％CO：孵育24h，待细胞贴壁后更 各瓶取 1mL细胞液分别转入 1．5mL离心管离心，用 D- 换无血清培养液继续培养 24h，随机分 8组：每组6孔，正 Hanks液洗3遍 ，4％甲醛固定，PBS洗涤，制成单细胞悬液， 常对照组含 10％小牛血清RPMI1640培养液 100 ；模型组 流式细胞仪检测 LDL-R表达量，激发波长：488nm，检测波 (OX—LDL组)为上述等量培养液中加OX-LDL至终浓度为 l0 长：500—550检测荧光强度。 mg／L；姜黄素，姜黄素酯化物各3个剂量组。37oC、5％CO2 2 结果 继续培养48h后，将原培养液吸净，每孔加入0．5mg／mL 2．1 姜黄素酯化物对平滑肌细胞增殖的抑制作用 MTF100 ，继续孵育4h，弃MTI液后每孔加DMSO100IxL 实验可见，10mg／L的OX-LDL有促牛 VSMC增殖作用 充分溶解深蓝色结晶，酶标仪570nm测吸光度(A)，计算其 (P0．05)；姜黄素和酯化物 3个剂量组均有抑制 OX—LDL 对ox．LDL促牛VSMC增殖的抑制率 ，