骨髓间质干细胞体外定向诱导分化为软骨细胞的实验研究.pdfVIP

.362. 中国骨伤 2008 年5 月第 21 卷第5 期 China J Orthop Trauma ,May.2008 ,Vol.21 ,No .5 ·.基础习t!究· 骨髓间质干细胞体外定向诱导分化为软骨细胞的 实验研究 同志超 1 ，杨镇 1 ，同志勤 2 ，王坤正 2 ，杨团民 1 ，石宗利 3 ，李毅 1 ，郭雄 4 (1.西安市红十字会医院骨科，陕西 西安 710054;2.西安交通大学第二医院骨科;3. 兰州交通大学机电工程学院材 料研究所;4.西安交通大学骨病研究所) [摘要] 目的:探讨分离骨髓间充质千细胞(MSCs) 并诱导其向软骨细胞转化的体外培养方法，为软骨组织工程 的种子细胞来源提供实验依据。方法:抽取兔熔骨骨髓液，经梯度离心法和贴壁法进行体外培养，贴壁细胞传代，取第 7 3 代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂[转化生长因子 (TGF-ß，) 10 nglml 、地塞米松 10- moVL、维生素 C 50μmoV L]，经 7 、 14 、 21 d 诱导培养后，倒置显微镜观察细胞形态，免疫组织化学染色检测软骨特异性E 型胶原表达。将诱导细 胞与软骨支架材料一一一聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸(CPP/PLLA) 复合， 1 周后终止培养，扫描电镜观察细胞恭附情况。 结果:诱导后细胞体外扩增能力显著降低，细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形或类圆形转变，诱导 21 d 后细 胞形态变化最为显著， n 型肢原免疫纽化染色深而均匀。诱导后的 MSCs 可在支架材料内良好恭附生长。结论:体外培 养的 MSCs 可定向诱导分化为软骨细胞，分泌软骨细胞特异性基质，可用作软骨组织工程的种子细胞。 [关键词] 骨髓; 间充质千细胞; 软骨细胞; 组织工程 Study of inducing bone marrow-derived mesenchymal stem ceUs into chondrocytes in vitro TONG Zhi-chω* , YANG Zhen , TONG Zhì-qìn , WANG Kun-zheng , YANG Tuan-mìn ,SHI Zong-lì ,Ll Yi , GUO Xwng. * Dep副阳nt 01 Orthopaedics , Xìan Red Cross Society Hospìt a1 ,Xian 71∞54 ， Sh晒1Xi ， Chìna ABSTRACT Objective: To explore a method of isolation ,culture and chondrogenic phenotype differentiation of mesenchy- mal stem celh( MSCs) from the bone marrow of rats in vitro and to offer experimental reference for the resources of seeding cells in cartilage tissue engineering. Methods: MSCs were isolated from bone marrow and purified by density gradient centrifuge and cultured in vitro. The MSC adherence fo口ned and those in passage 3 were chosen to induce into chondrogenic differentiation. After 7 , 14 , 21 days ,immunohistochemical techique was applied to detect the expression of collagen type n .The differentiated cells were implanted on the CPP/PLLA composites. After the cell-scaffold co