高速逆流色谱分离制备紫锥菊中的菊苣酸.pdfVIP

第36卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报 第7期 2008年7月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 964—966 高速逆流色谱分离制备紫锥菊中的菊苣酸 刘建华 赵善仓 王晓“ 耿岩玲 李福伟 (山东省科学院山东省分析测试中心，济南250014) (农业部食品质量监督检验测试(济南)中心，济南250100) 摘 要 建立了高速逆流色谱分离制备紫锥菊有效成分菊苣酸的新方法。溶剂系统为V(正己烷)： (乙酸乙 酯)： (甲醇)：v(0．5％乙酸)：1：4：2：5．5，上相为固定相，下相为流动相。从200 mg紫锥菊粗提物一次分离得 到纯度为96．8％的菊苣酸33．6 mg，并用LC—MS—MS鉴定了化学结构。 关键词 高速逆流色谱，紫锥菊，菊苣酸 1 引 言 紫锥菊(Echinacea purpurea)又称松果菊，是目前国际上受到普遍重视的一种免疫促进剂和免疫调节 剂 。菊苣酸是紫锥菊中极为重要的免疫活性成分之一。近年来的药理研究表明，菊苣酸具有增强免疫 功能和抗炎作用，并能抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白免受可导致降解的自由基的影响 ，4 J，还具有抑制 HIV．1和HIV．1整合酶的作用 J。因此，无论在该类植物药还是在保健食品中，菊苣酸的含量均成为其 制剂质量的重要指标。建立相关成分的高效分离纯化方法具有重要意义。由于菊苣酸是多羟基的酚类化 合物，传统分离方法由于固相吸附等因素的影响，分离困难，收率低。高速逆流色谱(HSCCC)是一种不使 用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术，克服了固相载体对样品的吸附损失、变性等缺点，并可以在短 时间内实现高效制备性分离，因而在植物有效成分的分离与提纯方面得到了广泛的应用 。本实验采 用AB．8大孔吸附树脂从紫锥菊水提物中得到粗提物，并以此粗提物进行HSCCC分离纯化，经一步分离得 到纯度为96．8％的菊苣酸，制备量大，操作简单。 2 实验部分 2．1 仪器、试剂与材料 GS10A高速逆流色谱仪(北京新技术研究所)；Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司)；Quattro Ultima质谱仪包括ESI(电喷雾电离)及Masslynx 4．0数据处理系统(美国Waters公司)。 紫锥菊提取物菊苣酸含量为2％(西安天一生物技术有限公司)；粗提物的制备及HSCCC分离用的溶 剂均为分析纯(济南巨业化学试剂有限公司)；甲醇为色谱纯(禹城化工厂)。水为过滤蒸馏水。 2．2 菊苣酸粗提物的制备 称取紫锥菊提取物500 g，加入50％乙醇1．5 L，超声提取30 min，过滤，残渣再以相同的方法提取2次， 合并提取液，减压蒸馏，回收乙醇，得菊苣酸浓缩液2 L，加到装有1100 g预处理过的AB一8型大孔吸附树脂 的层析柱(120 cm×5．2 cm)上，静止吸附1．0 h后，先用水洗脱除去糖类等杂质，然后再30％乙醇洗脱，接 收30％乙醇洗脱物，减压浓缩除去乙醇后，真空冷冻干燥，得褐色粉末(40．2 g)，冰箱保存，备用。 2．3 两相溶剂系统及样品溶液的制备 HSCCC溶剂体系为 (正己烷)： (乙酸乙酯)：V(甲醇)：V(0．5％乙酸)=1：4：2：5．5，配制于分液漏 斗中并剧烈振荡，体系分相平衡后分离出上下相，分别超声脱气5 min备用。取200 mg菊苣酸粗提物， 加入上相下相各2 mL，振荡使之完全溶解，以备HSCCC分离。 2．4 ItSCCC分离 首先将固定相用泵以9 mL／min的流速灌满色谱分离柱，然后将柱的首端与六通进样阀相接。开启 2007-09-07收稿；2007—12-28接受 本文系山东省重大科技计划项目(Nos．2006G1109078、1108097)和国家作物生物学重点实验室开放基金(No．2005-04)资助 _E-mail：wangx@keylab．net 维普资讯 第 7期 刘建华等：高速逆流色谱