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现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2008，Vo1．24，No．7
高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒荧光定量PCR
检测方法的建立
刘园园’，肖性龙’一，吴晖’，余以刚’，张经纬 ，程邦照 ，龚俊 ，杨晓泉’，刘冬梅’
(1_华南理工大学轻工与食品学院，广东广州5l0640)(2．深圳太太基因工程有限公司，广东深圳51805)
摘要：为了对当前爆发流行的高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒建立快速准确的检测方法，根据该类病毒在Nsp2基因
1594．1680处缺失87个碱基的特点．设计了一对特异性引物和一个Taqman~ -，通过对反应条件的优化，建立了荧光定量PCR-~ J方法。
该方法特异性强，灵敏度高，能很好地区分高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒和其它病毒，没有发现假阳性和假阴性现象，检测
病毒滴度达到1TCID50。用该法对38q~g：4R样本进行检测，阳性率60．5％，与常~．PCR检测法符合率100％。
关键词：高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症；荧光定量PCR；检测
中图分类号：$851．34；文献标识码：A；文章篇号：1673．9078(2008)07．0731-04
Development 0f Fluorescence Quantitative PCR Assay for the virulent
Porcine Reproductive and Respiratory syndrome virus
LIU Yuan．yuan ，ⅪAo Xing．1ong ，wu Hui ，YU Yi-gang ，ZHANG Jing-wei2CHENG Bang-zhao ，GoNG J岫2
， ，
YANG Xiao-quan ，LIU Dong—mei
(1．College ofLight IndustryFood Science，South China Unive~ity ofTechnology,Guangzhou 510640，China)
(2．Shenzhen Taitai Genomics，Inc．，Shenzhen 5 1 8057，China)
Abstract：A method for rapid detection of the highly virulent Porcine Reproductive and Respiratory syndrome virusffI—PRRSV1 was
developed using fluorescence quantitative PCR assay(FQ—PCR)．The Taqman probe and a pair ofspecific primers and were designed based on
Nsp2 gene with 87一base-pa~sequence deletion．Then the FQ—PCR method was developed by optimization of the reaction conditions，which
showedhi【gh specificityand sensitivity，andwell differentiatedH—PRRSVform otherviruses．1TC1D50／ml oftheH—PRRSV couldbedetected
by this method．Besides，similar positive percentages of 38 tissue specimens(60．5％)were found using FQ—PCR assay or conventional PCR
assay、
Key words：hi ly virulent Porcine Reproductive and Re~iratory syndrome virus(H-PRRSV)，fluorescence quantitative PCR
(FQ
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