大孔吸附树脂纯化刺玫果总黄酮的工艺研究.docVIP

　　大孔吸附树脂纯化刺玫果总黄酮的工艺研究 杨 扬１，２，胡雪媛１，王晓林１，薛健飞１，钟方丽１ （１．吉林化工学院化学与制药工程学院，吉林 吉林 １３２０２２； 2.吉林大学化学学院，长春 １３００１２） 摘要：对山刺玫（Ｒｏｓａ ｄａｖｕｒｉｃａ Ｐａｌｌ．）果总黄酮的大孔树脂纯化工艺进行了优化研究，以比吸附量和比解吸量为考察指标，进行了Ｄ－１０１大孔树脂纯化工艺的优化。结果表明，其最佳工艺条件为生药浓度０．０２５ ｇ／ｍＬ；最佳上样量为０．２３ ｇ／ｇ（生药量／树脂量）；最佳吸附时间为３０ ｍｉｎ；上柱液ｐＨ为２．０～４．０；吸附速率为１ ＢＶ／ｈ；洗脱液为３ ＢＶ ７０％乙醇，洗脱流速为１ ＢＶ／ｈ。在此最佳条件下得到的山刺玫果提取物总黄酮含量由２０％提高到８５％左右。采用Ｄ－１０１型大孔树脂纯化山刺玫果总黄酮的效果较好，且操作简单，为山刺玫果的综合利用提供了依据。 .. 关键词：山刺玫（Ｒｏｓａ ｄａｖｕｒｉｃａ Ｐａｌｌ．）；果实；Ｄ－１０１型大孔树脂；总黄酮；纯化 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ ：０４３９－８１１４（２０１５）０２－０４１２－０４ ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０２．０３９ 山刺玫果又名野蔷薇果，系蔷薇科蔷薇属植物山刺玫（Ｒｏｓａ ｄａｖｕｒｉｃａ Ｐａｌｌ．）的成熟果实，是一种食药同源、经济价值极高的野生果类［１，２］，广泛分布在我国东北、华北、西北等地。山刺玫全身是宝，《中药大辞典》谓其果实有健脾理气、养血调经的作用，且酸甜可食，可治消化不良、食欲不振，民间大量采食或用于泡酒、泡茶等［３，４］，山刺玫果的活性成分主要有三萜类化合物、黄酮、多种维生素、微量元素及人体必需的氨基酸等［５］。山刺玫花大而美丽，为优美的绿化观赏和绿篱树种。山刺玫根有止咳祛痰、 抗菌止痢及止血功能。黄酮类化合物具有抗菌、抗炎、保肝、扩冠、消除体内自由基、抗衰老、增强人体免疫力等多种生理活性，还可以降低血液黏度，加快血液循环，临床上用于脑血栓、脑动脉硬化的治疗，具有高效、低毒副作用的优势［６－９］。 大孔吸附树脂是一类具有多孔立体结构的非离子型人工合成的有机高分子聚合物吸附剂，具有化学稳定性高、再生处理简单、选择性好、吸附速率快、吸附容量大、比表面积大、节省费用等诸多优点，被广泛用于天然产物的分离和纯化［１０－１２］。本试验使用Ｄ－１０１型大孔吸附树脂对山刺玫果总黄酮进行纯化，并优化了Ｄ－１０１型大孔吸附树脂纯化山刺玫果总黄酮的工艺条件，为更有效地利用山刺玫果，发挥其最大经济效益提供依据。 １ 材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 植物材料 山刺玫果采自吉林市丰满区白山乡，经吉林化工学院药学系薛健飞博士鉴定为蔷薇科蔷薇属植物山刺玫的成熟果实。 １．１．２ 试剂 芦丁标准品，中国食品药品检定研究院（批号：１００８００－２００７０７）；Ｄ－１０１型大孔吸附树脂，西安蓝晓科技有限公司；硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠、无水乙醇均为分析纯，天津市大茂化学试剂厂；水为去离子水。 １．１．３ 仪器 ＴＵ－１８１０型紫外分光光度计，北京普析通用仪器有限公司；ＪＹ２００２型电子天平，上海精密科学仪器有限公司；ＲＥ－５２ＡＡ型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；ＳＨＺ－Ｄ型循环水式真空泵，河南省巩义市英峪仪器厂；ＣＳ１０１－ＡＢ型电热鼓风干燥箱，中国重庆实验设备厂。 １．２ 试验方法 １．２．１ 标准曲线的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁标准品１０．０ ｍｇ于５０ ｍＬ容量瓶中，加６０％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为０．２０ ｍｇ／ｍＬ的芦丁标准品溶液，分别吸取０．５、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ ｍＬ溶液于２５ ｍＬ容量瓶中，在３０ ℃水浴下，加５％ ＮａＮＯ２溶液 １．０ ｍＬ，摇匀，放置６ ｍｉｎ，加１０％ Ａｌ（ＮＯ３）３溶液 １．０ ｍＬ，摇匀，放置６ ｍｉｎ，加４％ ＮａＯＨ １０．０ ｍＬ，再加６０ ％乙醇定容至刻度，摇匀，放置１５ ｍｉｎ。以相应的试剂为空白，按照分光光度法，在５０５ ｎｍ处测定其吸光度Ａ，以吸收度Ａ为纵坐标，芦丁标准品浓度Ｃ（ｍｇ/ｍＬ）为横坐标，绘制标准曲线［１３，１４］，进行直线回归，回归方程：Ａ＝１１．８６８Ｃ＋０．００３ ５，Ｒ＝０．９９９ ７，结果表明，芦丁在０．００４～０．０４８ ｍｇ／ｍＬ范围内呈良好线性关系。 １．２．２ 样品溶液的制备 取粉碎的山刺玫果２５ ｇ，加６倍７５％乙醇，８５ ℃回流提取３次，每次５ ｈ，过滤，合并滤液，减压浓缩，用去离子水定容至２５０ ｍＬ，备用。 １．２．３ 总黄酮含量测定 取样品溶液、树脂吸附后液和解吸液各适量，分别置于