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采用HPLC法测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱含量【摘要】 目的 测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱的含量。方法 采用HPLC法,Inertsil C?18?(5 μm,150×4.6 mm); Dimonsil C?18?(5 μm,150×4.6 mm)。流动相:乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至2.5)(25:75);检测波长348 nm。结果 四个批号的样品测定结果(mg/100 ml)分别为:19.11、18.81、18.83、18.92。结论 该方法操作简便,结果稳定可靠,可用于骨质宁搽剂中盐酸小檗碱的含量测定。 【关键词】 骨质宁搽剂;高效液相色谱法;盐酸小檗碱 1 仪器和试药 高效液相色谱仪,日本岛津LC10AT,紫外检测器SPD-10AVP; N2000色谱工作站(浙江大学)。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所:供含量测定用,批号110713-200708)。乙腈为色谱级,重蒸水,其他试剂均为分析纯。骨质宁搽剂为浙江鼎泰药业有限公司生产,规格为每瓶装50 ml,批号为081102,081219,081222,081225。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 HPLC柱:Inertsil C?18?(5 μm,150×4.6 mm); Dimonsil C?18?(5 μm,150×4.6 mm)。流动相:乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至2.5)(25:75); 流速:1 ml/min;检测波长:取用上述流动相溶解的盐酸小檗碱对照品溶液作紫外扫描,显示于348 nm波长处有最大吸收(图2),遂选择该处作检测波长;柱温:室温;对照品溶液进样10 μ,样品溶液视含量高低不同,进样5 μ或10 μ;外标法定量。 2.2 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加流动相制成每1 ml含20 μg的溶液,即得。 2.3 样品溶液的制备 精密量取本品2 ml,置10 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。 2.4 系统精密度试验 在选定的条件下,注入对照品溶液共6次,面积平均值为6.332×10-5,RSD为 0.3%。 2.5 专属性试验 取供试品及缺黄连空白样品,按拟定的方法处理样品并测定,采用Inertsil C?18?柱,理论板数以盐酸小檗碱峰计为2800,与前相邻峰分离度为1.85,缺味样品无峰。 2.6 线性关系考察 依据标准规定盐酸小檗碱在本品中含量不得少于6.9 mg/100 ml及本方法,准确进样5~25?l对照品溶液(浓度为21.2 μg/ml,n=5),按上述色谱条件测定峰面积,具体数据见表1。 表1 线性关系试验数据 进样量(μg)0.1060.2120.3180.4240.530 峰面积(×105)3.146.309.4212.5615.68 以进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程如下: Y=2.1×103+2.955×106X r=0.99999 在此范围内(相当于本品中盐酸小檗碱含量为5 mg/100 ml~25 mg/100 ml)线性关系良好。 2.7 重复性试验 取同一批样品(批号081102),分别依2.3项下处理、进样5 μl测定。HPLC结果见表2。 表2 重复性试验结果 样品编号123456平均RSD(%) 峰面积(×105)5.645.625.615.625.675.705.640.7 2.8 加样回收率试验 采用加样回收法。精密量取已测含量的供试品(081102)1 ml于10 ml量瓶中,加对照品溶液(0.424 mg/ml)300 μl,用流动相稀释至刻度,摇匀。共制取6份,依法测定,结果见表3。 表3 加样回收率测定结果(n=6) 序号 样品中盐酸小檗?碱含量(μg/ml) 添加盐酸小檗?碱含量(μg/ml) 测得盐酸小檗?碱总含量(μg/ml) 回收量?(μg/ml) 回收率?(%) 平均回收?率(%) RSD(%) 131.7212.6099.1 232.0012.88101.3 331.8312.7199.9 419.1212.7231.8112.6999.899.81.4 531.5512.4397.7 632.0112.89101.3 2.9 样品测定 分别按所定的方法测定了四个批号的样品,平行取样2份,按法测定,结果(mg/100 ml)分别为:19.11、18.81、18.83、18.92。 3 讨论 3.1 理