HPLC法测定玉叶清火胶囊中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯含量.doc

HPLC法测定玉叶清火胶囊中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯含量（1.岑溪市人民医院，广西 岑溪 543200；2.梧州食品药品检验所，广西 梧州 543002）?? 摘 要：目的：建立测定玉叶清火胶囊中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的高效液相色谱法。方法：采用VP-ODS柱C18（250mm×4.6mm，5μm）柱分离，以甲醇?水（55∶45）为流动相，在250nm处检测。结果：穿心莲内酯在0.00676～0.1082g范围内线性关系良好（r=0.9998），平均回收率为98.82%，RSD=0.8%（n=6）;脱水穿心莲内酯在0.01288～0.2061g范围内线性关系良好（r=0.9997），平均回收率为98.95%，RSD=1.6%（n=6）。结论：该法操作简便，方法稳定，专属性强，可作为该制剂的质量控制方法。? 关键词：玉叶清火胶囊；HPLC；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯? 中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）03-0023-02? 玉叶清火胶囊是由玉叶清火片[1]改剂型而来，它包含玉叶金花、穿心莲、栀子、墨旱莲、倒扣草等中草药组方。具有清热解毒、消肿止痛的功效，用于喉痹、暴喑、急性咽炎以及其它风热症者。为控制该药品的质量，本研究采用HPLC法测定穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。? 1 仪器与试药? 1.1 仪器? 岛津LC-2010 HPLC；日本AND GR-202电子分析天平。? 1.2 试药? 穿心莲内酯对照品、脱水穿心莲内酯对照品购于中国药品生物制品检定所；水为高纯水；甲醇（色谱纯Fisher Scientific）；其它化学试剂均为分析纯。? 2 方法与结果? 2.1 色谱条件? 色谱柱为岛津VP-ODS柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相：以甲醇?水（50∶50）为流动相;流速：1.0mL/min;检测波长：250nm;柱温为室温；进样：10μL。? 2.2 溶液的配制? 2.2.1 对照品溶液的制备? 精密称取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品适量，分别加甲醇制成每1mL含穿心莲内酯50μg、脱水穿心莲内酯100μg的溶液，即得。? 2.2.2 供试品溶液的制备? 取本品内容物，研细，取约1.5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。? 2.2.3 阴性对照溶液? 按处方比例称取除穿心莲以外的其余味药，按玉叶清火胶囊制备工艺制成缺穿心莲阴性样品;按2.2.2项下操作，制成缺穿心莲的阴性对照溶液。? 2.3 系统适用性试验? 在上述色谱条件下，穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的保留时间分别为8.42min和23.38min，与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，对称因子在0.95～1.05之间，理论塔板数按穿心莲内酯计算不低于4000，按脱水穿心莲内酯计算不低于8000。阴性对照对样品测定无干扰。结果见图1、图2。? 2.4 专属性考察? 取缺穿心莲阴性样品按供试品溶液制备方法制备，进样，测定。图谱表明在该色谱条件下，阴性对照无干扰，结果见图3。? 2.5 供试品测定? 按上述色谱条件，取供试品溶液，进样，测定。图谱中供试品溶液与对照品溶液有相同的色谱峰，表明供试品为穿心莲内脂和脱水穿心莲内脂，如图4。? 2.6 标准曲线的制备? 精密称取穿心莲内酯13.52mg，脱水穿心莲内酯对照品25.76mg置100mL量瓶中，摇匀，作为对照品储备溶液（浓度分别为0.1352，0.2576mg/mL）。精密量取对照品储备溶液0.5、1、2、4、8mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述6个对照品溶液各10mL，按正文拟定的色谱条件测定。以穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品进样量（g）为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程为：? 穿心莲内酯：Y=823520X+4333.3（r=0.9998）? 脱水穿心莲内酯：Y=1762866X-5264（r=0.9997）? 结果表明：当穿心莲内酯在0.00676～0.1082g范围内，脱水穿心莲内酯在0.01288～0.2061g时，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。? 2.7 精密度实验? 取同一份供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，测定峰面积积分值，穿心莲内酯的RSD为0.36％，脱水穿心莲内酯的RSD为0.29%。? 2.8 稳定性实验? 取同一份样品溶液，放置0，1