RP-HPLC同时测定中药苦黄注射剂中4种生物碱含量.doc

RP-HPLC同时测定中药苦黄注射剂中4种生物碱含量摘要：目的：建立同时测定中药苦黄注射剂中生物碱的含量方法。方法：采用高效液相色谱法同时在线检测4个生物碱类活性化合物，通过实验优选出最佳的流动相组成，流速和检测波长。结果：4个生物碱的标准曲线显示很好的线性关系，该检测方法精密度好、稳定性和重复性好、分析效率高。结论：本方法简便易行，可用于该类生物碱的同时测定，对控制苦黄注射剂的质量具有重要意义。 ? 关键词：苦黄注射剂；生物碱；高效液相? 中图分类号：R284文献标识码：A? 文章编号：1007-2349（2011）11-0076-02?? 苦黄注射液是由国家卫生部批准常熟雷允上制药有限公司生产的中药复方静脉注射液。处方由茵陈、柴胡、苦参、大黄和大青叶等中药组成，具有湿热利湿、疏肝退黄的功效，主治湿热黄疸。临床上用于湿热内蕴而引起的病毒性黄疸型肝炎的退黄。具有稳定和良好的临床疗效。苦黄注射剂活性成分中含有蒽醌类化合物，黄酮类化合物和生物碱类化合物，其中生物碱有苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱等生物碱活性成分，目前文献有报道蒽醌类化合物的检测方法[1]，但是苦黄注射剂活性成分的质量标准检测方法只能一个一个对活性成分进行单独检测，检测工作繁琐，检测效率低，且检测的活性成分数量有限，不能很好的反映制剂的质量，所以本实验创立了用高效液相色谱法同时检测苦黄注射剂中各生物碱类化合物的检测方法。? 1材料与仪器? 11供试液的制备取苦黄注射液5批（1010191、1010151、1009072、1009211、1007311）（药品批准文号为国药准字作为供试液稀释10倍，045μm微孔滤膜过滤后进行分析? 12混合标准对照液制备精密秤取苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱各10mg，配成1mg/mL的混合标准对照液。? 13仪器高效液相色谱仪分析（安捷伦110型分析仪）? 2方法学考察? 21色谱条件流动相：A相为水-四氢呋喃-氨水体积比为100∶01∶01，B相为甲醇，线性梯度洗脱（其中线性梯度洗脱程序为：0min时流动相A∶B的比例为100∶0，25min时流动相A∶B的比例为82∶18，70min时流动相A∶B的比例为28∶72，流速08mL/min，紫外检测器，检测波长为220nm，柱温为30℃。）? 22生物碱类化合物标准曲线的制备精密吸取苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱混合标准液2μL、4μL、6μL、8μL和10μL，按照上述21色谱条件进行液相分析，分别注入安捷伦110高效液相色谱仪分析70min。然后以峰面积为纵坐标、各标准品的浓度为横坐标绘制标准曲线。 ? 23精密度试验日内精密度测定：取混合对照品溶液，按21的色谱条件进行液相分析，在一天内连续进样6次，用以上22标准曲线计算混合对照品中苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱的含量，求出平均值，并计算各化合物的标准偏差（RSD）。结果表明最大标准偏差小于152。如表1所示。? 日间精密度测定：取混合对照品溶液，按21的色谱条件进行液相分析，对照品溶液连续进样3天，用以上22标准曲线计算混合对照品中苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱的含量，求出平均值，并计算各化合物的标准偏差（RSD）。结果表明最大标准偏差小于238。 24稳定性试验取21的样品溶液，按21的色谱条件进行液相分析，在0、2、4、6、8、12、24、48h内测定，并根据表22的标准曲线计算各生物碱的含量。计算标准偏差均小于232%。? 25加样回收试验取苦黄注射液（药品批准文号为国药准字，11所述方法制备得到样品，分别加入苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱适量。按21的色谱条件进行液相分析，并且用外标二点法计算加入对照品后样品中含有的苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱的含量。计算回收率和相对标准偏差，4种生物碱的回收率范围为9581~1053%，最大标准偏差小于45%。? 3样品含量测定? 采用高效液相色谱法测定生物碱类化合物，分别精密吸取以上5批苦黄注射液（药品批准文号为国药准字的供试液各10μL，按21的色谱条件进行液相分析，注入安捷伦110高效液相色谱仪分析70min，然后按22所述的总生物碱标准曲线鉴定和检测各化合物的含量。图5为混合标准品的高效液相色谱分析图，图6为中药苦黄注射剂样品中生物碱类化合物的高效液相色谱检测分析图。图中1，2，3和4的色谱峰分别为氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱和苦参碱。在色谱柱上具有较好的分离。? 4讨论? 由图1~图2所示，苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱四种生物碱类化合物在本实验提供