快速分离高效液相色谱法测定虎杖中大黄素及大黄素甲醚.doc

快速分离高效液相色谱法测定虎杖中大黄素及大黄素甲醚【摘要】 目的：研究了快速分离高通量高效液相色谱法测定虎杖样品中的大黄素和大黄素甲醚。方法：虎杖样品提取液以Agilent zobax C18 (4.6 mm×50mm×3.5?m)快速分离色谱柱为固定相，乙腈-0.1 %高氯酸为流动相进行梯度洗脱，流速为1mL.min-1，用紫外检测器检测,检测波长为432nm。结果：大黄素和大黄素甲醚的标准回收率分别为94%~102% 和 93%~96%； RSD分别为0.6%~3.2% 和 1.1%~2.3%。结论：用该方法测定了虎杖中的大黄素和大黄素甲醚，结果令人满意。 【关键词】 虎杖；大黄素；大黄素甲醚；高效液相色谱法 【Abstract】Objective： A rapid high performance liquid chromatography method（HPLC）for the determination of emodin and physcion in polygonum cuspidatum was studied. Method：Emodin and physcion can be separated on a Agilent zobax Eclipse XDB-C18 (4.6mm×50mm×3.5μm). The mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%HClO4 in gradient mode.The flow rate was 1.0mL min-1. The wavelength of the measurement was 432nm. Emodin and physcion in polygonum cuspidatum were monitored by SPD, and determined by this method. Result: The recovery of emodin and physcion was respectively 94%~102% and 93%~96% The relative standard deviation of emodin and physcion was respectively 0.6%~3.2% and 1.1%~2.3%. Conclusion: The method was applied to the determination of emodin and physcion in Polygonum cuspidatum with good result. 【Keywords】Polygonum cuspidatum；Emodin；physcion；HPLC 虎杖为蓼科植物（Polygonem cuspidutum Sieb.et Zucc）虎杖的干燥根茎和根，春秋二季采挖，味微苦、涩，有利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛、止咳化痰之功效，主要用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，闭经，跌打损伤，肺热咳嗽等症[1]。虎杖中含有大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等抗炎、抑菌、抗病毒及抗肿瘤的作用的蒽醌类化合物[3-6]，也含有虎杖苷、白藜芦醇等具有抗氧化、抗肿瘤的非蒽醌类化合物。目前，蒽醌类化合物的测定常用高效液相色谱法，但通常会出现分离时间较长，溶剂的消耗量较大，分离度不太理想等缺点[7]。针对以上缺点，本文通过采用Agilent ZOBAX Eclipse XDB-C18（4.6mm×50 mm,3.5μm）高通量快速分离色谱柱，优化流动相，优化检测波长等方法实现了虎杖中蒽醌类化合物的分离。此方法具有分离时间较短，柱压较底，流动相消耗较少等优点，同时采用双指标法对虎杖进行质量控制具有一定的意义。 1实验部分 1.1仪器和试剂 SPD-10Avp紫外检测器：SHIMADZU；LC-10ATvp二元泵：SHIMADZU；SK2200LH超声波清洗器：上海科导超声仪器有限公司；UV-4802双光束紫外可见分光光度计：尤尼柯上海仪器有限公司；AUW120D电子天平：SHIMADZU。大黄素：中国药品生物制品鉴定所（110756-200110）；大黄素甲醚：中国药品生物制品鉴定所（110756-200110）；乙腈：色谱纯；其他所用溶剂均为分析纯；水：二次蒸馏水；虎杖：购于怀化市医药公司。 1.2储备液制备 取大黄素和大黄素甲醚对照品，放入五氧化二磷干燥器中干燥24h。精密称取大黄素0.00501g，用10mL的甲醇溶解，并定容至50mL， 即得0.1002mg.mL-1的大黄素储备液；精密称取大黄素甲醚0.00500g，用约10 mL乙醇溶