乙醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响.PDF

热带亚热带植物学报 2005，l3(4)：329-312 Journa／ofTropicalandSubtropcialBotan) 乙醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响 初志战 ，黄卓烈 ，巫光宏 ，何 平 ，詹福建 ，丘泰球2 (1．华南农业大学生命科学学院，广州 510642：2华南理工大学食品牛物工程学院，广州 510642) 摘要：研究了乙醇溶液对木瓜蛋 白酶水解酪蛋 白的催化活性及构象的影响。结果表明，木瓜蛋31酶在一定浓度乙醇溶 液中水解酪蛋白的活性有显著上升。动力学测定表明木瓜蛋 白酶在乙醇溶液中米 氏常数(Km)_卜降。差示光谱显示，在 乙醇溶液中木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化。荧光发射光谱表明，木瓜蛋 白酶住乙醇溶液中发射峰位几乎没移动， 但发射强度明显增高。 关键词 ：木瓜蛋 白酶 ；乙醇 ；酶活性 ：动力学；构象 中图分类号 ：Q556 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—3395(2005)04—0329—04 EffectofEthanolon CatalyticActivityofPapain CHU Zhi．zhan，HUANG Zhuo一1ie ，WU Guang-hong， HEPing，ZHANFu．jian，OiUTai—qiu (1．Collegeof，| Science，SouthChinaAgricultureUniversity，Guangzhou510642，China； 2．CollegeofFoodandBioengineering,SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou510642，China) Abstract：Thealterationsofpapain activity and conformation were studiedinconditionofpretreatmentwith ethanolsolutionsatdifferentconcentrations．differentpretreatmenttimes．and inconditionofvariOUSreaction concentrations．TheresultshowedthatthepapainactivitywasobviouslyincreasedandtheIOnvaluewasdeclined whentreatedwithethano1．Ultravioletdifferencespectra showedthatthesecondarystrucutreofpapainalteredin ethanolsolutions．Fluorescenceemissionspectrashowedthatthepeakoffluorescenceemissionwasnotshiftedbut thefluorescenceintensityinpapainincreasedinethanolsolutions． Keywords：Papain；Ethanolsolutions；Enzymeactivity；Kinetics；Confomr ation 生物酶作为高效的生物催化剂在工业、农业中 酪蛋白的反应条件 (预处理时间、预处理浓度 、反应 有广泛的应用，在二十世纪九十年代初用量就达到 浓度)、动力学参数及构象的变化进行 了探讨，以期 650ta-i[”。随着 自然资源的日益缺乏，如何提高酶的 找到适宜的反应条件和引起酶活性改变的原因，为 活性就成为酶工程的一个重要的发展方向。传统意 木瓜蛋白酶在生产 中的应用提供科学依据 。 义上的酶催化是在水溶液 中进行，但在二十世纪六 十年代就有人发现酶在有机溶剂中仍具有活性，直 1材料和方法 到八十年代这一方面的研究才逐渐受到人们关注田。 经过二十多年的发展，酶学领域也有了一个全新的 实验采用的木瓜蛋 白酶粗酶 (部分纯化)、木 分支一非水酶学