pp+GalNacT-10基因真核表达载体的构建及表达.pdfVIP

· 756 · 郑州大学学报 (医学版) 2012年 11月 第47卷 第6期 doi：10．3969／j．issn．1671—6825．2012．06．003 PPGalNacT-10基因真核表达载体的构建及表达 高 媛¨，刘振华 ，冯菁华¨，李晓云¨，孙其诂¨，张 宝¨，郑文岭，，马文丽 # 1)南方医科大学基因工程研究所 P}i,l510515 2)苏州卫生职业技术学院 苏州 215009 3)华南基因组研究中心FN 510800 #通讯作者，女，1964年 4月生，博‘士，教授，研究方向：基因诊断与基因治疗，E—mail：wenli668@gmail．com 关键词 PPGalNacT．10；真核表达载体；293T细胞 中图分类号 R34 摘要 目的：构建PPGalNacT一10基因真核表达载体。方法：采用PCR方法合成含有酶切位点 (XbaI、EcoR I)的PPGalNacT一10eDNA。构建 pMD19T—GaINacT一10-ORF和 pMD19T—GalNaeT一10·antisense，鉴定及测序证实 cD— NA片段大小和序列。双酶切 目的载体 pcDNA3．1后，与GalNacT-10·ORF和GalNacT-10-antisense片段进行连接，构 建正义和反义真核表达载体 pcDNA3．1-GalNacT一10一ORF和pcDNA3．1．GalNacT-10-antisense，将其分别转染 293T细 胞 ，Westernblot法检测 PPGalNacT-10蛋 白的表达 。结果：pcDNA3．1-GalNacT一10一ORF和pcDNA3．1一GalNacT．10-an— tisense包含大小、序列正确的PPGalNacT一10片段；PPGalNacT一10蛋 白在转染 pcDNA3．1一GalNacT·10-ORF的293T 细胞中高表达，在转染 peDNA3．1一GalNacT·10一antisense的293T细胞中表达降低。结论：成功构建了PPGalNacT一10 基因正义和反义真核表达载体。 ConstructionandexpressionofeukaryoticexpressionvectorforPPGaIN— acT一10 gene GAO Yuan¨ LIUZhenhua ，FENGJinghua”，LIXiaoyun¨SUNQizhe¨，ZHANGBao¨，ZHENGWen． ， ， 1ing ，MA Wenli¨ J)InstituteofGeneticEngineering，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515 2)SuzhouHealth College，Suzhou215009 3)SouthChinaGenomeResearchCenter，Guangzhou510800 Keywords PPGalNacT一10；eukaryotieexpressionvector；293T cell Abstract Aim ：ToconstructeukaryoticexpressionvectorofPPGalNacT-10gene．Methods：PCRsynthesisfulllength ofPPGalNacT一10cDNAcontainingrestrictionsites(XbaI，EcoRI)．pMD19T．GalNacT．10一ORFandpMD19T．GalNacT一 10-antisensewerebuild，andthesequenceandsizeofPPGalNacT一10cDNAfragmentwereconfimedtobecorrectAfterob． ． jectivev