成纤维生长因子（FGF）23基因沉默对甲状旁腺激素（PTH）促成骨细胞分化作用的影响.pdfVIP

复 里掌握 (医学版) 286 Fudan Univ J Med Sci 成纤维生长因子 (FGF)23基因沉默对 甲状旁腺激素 (PTH)促成骨细胞分化作用的影响 王金凤 徐小雅 丁巧灵 周 轶 金慰芳 王洪复 高建军 (复旦大学放射医学研究所骨代谢研究室 上海 200032) 【摘要】 目的 研究 内源性成纤 维生 长因子 23(fibroblastgrowthfactor23，FGF23)对 甲状旁 腺激素 (parathyroidhormone，PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法 采用酶消化法分离培养新生 SD大 鼠头盖骨 成骨细胞 ，应用小发夹 RNA(shorthairpinRNA，shRNA)干扰技术 (RNAi)沉默成骨细胞 FGF23表达 ，应用 MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶 (alkalinephosphates，ALP)活性，应用real-timeRT-PCR法检 测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin，OCN)等基因mRNA水平，研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因 沉默细胞的作用。结果 rhPTH， 对培养成骨细胞增殖促进作用明显，分化促进作用弱。1×10I1。～1X10 mol／LrhPTH 一 作用3天，细胞增殖率增加 31．6 ～5O．5 (P0．05)，而细胞 比活性未见 明显改变 。同时其 ALP和OCN转录水平轻度上调 ，分别较对照组增加 35％(P0．05)和 16％(P0．05)。rhPTH 上调成骨细 胞 FGF23mRNA水平 (4倍)，该作用可被针对 FGF23特异的shRNA转染所抑制 。FGF23基因沉默后 PTH促 分化作用明显增强，其 ALP和OCNmRNA水平分别较对照组增加 1．8倍 (PO．05)和 5．8倍(P0．05)，显示 内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论 内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节，FGF23上 调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。 【关键词】 甲状旁腺激素(PTH)； 成纤维细胞生长因子 (FGF)23； RNA干扰 (RNAi)； 成骨细胞 ； 大 鼠 【中图分类号】 R336； R589．5 【文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn．1672—8467．2013．03．007 Influence0fFGF23silenceon differentiation ofratcalvarial osteoblasticcellsbyparathyroidhormoneinvitro W ANG Jin—feng，XU Xiao—ya，DING Qiao—ling，ZHOU Yi，JIN W ei—fang， WANG Hongfu，GAOJian—junA (DepartmentofBoneMetabolism ，InstituteofRadiationMedicine，FudanUniversity，Shanghai200032，China) [Abstract] 0bjective Toinvestigatetherolesoffibroblastgrowthfactor23(FGF23)inosteoblast byRNA interference(RNAi)anditsinfluenceoncel1differentiationbyparathyroidhormone (PTH) invitro． Methods Theprimaryratcalvaria1osteoblastswereculturedinMEM medium containing 10 charcoalstrippedfetalbovineserum(CSFBS)andtreatedwithrhPTH1—34for3days．Thechanges ofprolife