成纤维细胞激活蛋白及其突变体真核表达质粒的构建及鉴定.pdfVIP

广东医学 2016年7月 第37卷第 13期 GuangdongMedicalJournal Ju1．2016，Vo1．37，No．13 · 1909 · 成纤维细胞激活蛋白及其突变体真核表达 质粒的构建及鉴定木 赵萌，邵婷如，吕晓智 南方医科大学南方医院口腔科、南方医科大学 口腔医学院(广州510515) 【摘要】 目的 构建并鉴定人成纤维细胞激活蛋白(FAPa)真核表达质粒 pcDNA—wFAPa(野生型FAPot)、 pcDNA—tFA (胞外段FAP仅)和pcDNA—mFAPa(缺失624—704位氨基酸的突变型FA )。方法 以口腔癌组 织总RNA为模板 ，采用RT—PCR方法扩增wFAPacDNA基因片段 ，连接至真核表达质粒pcDNA3．1(+)获得重 组pcDNA—wFAPa质粒。以重组 pcDNA—wFAPa为模板，扩增 tFAPa基 因片段；用 overlapPCR技术，获得 mFAPot基 因；分别连接至 pcDNA3．1(+)获得重组 pcDNA—tFA 和 pcDNA—mFAPa质粒 。结果 酶切鉴定和 测序验证皆显示pcDNA—wFAPa、pcDNA—tFAPct和pcDNA—mFAPa为正确重组质粒。结论 成功构建人野生 型FAP0【(wFAPa)、胞外段FAPa(tFAPa)和突变型 FAPa(mFAPa)真核表达质粒，为进一步研究FAPa在口腔鳞 癌发病过程中的分子机制奠定基础。 【关键词】 成纤维细胞激活蛋白；真核表达载体；pcDNA3．1(+) ConstructionandidentificationofeukaryoticexpressionplasmidspcDNA —FAPotanditsvariants． ZHAOMeng， SHAOTing—ru，LVXiao～zhi．DepartmentofStomatology，NanfangHospital，SouthernMedicalUniversity，Collegeof Stomatology，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515 Correspondingauthor：LVXiao—zhi．E—maif：lxzsurgeon@ 126．coin 【Abstract】 0bjective Toconstructandidentifytheeukaryoticexpressionplasmidscontainingwild—typeFAPa anditsmutnats．M ethods ThewFAPotsequenceandtFAPotsequenceobtainedbyRT—PCR amplificationusingahiSh fidelitygeneexpressionprofilingstrategymediatedbyPfuproo~eadingpolymerases，wereclonedintotheeukaryoticex— pressionvectorpcDNA3．1(+)．ThemFAPawasobtainedbyoverlapPCRusingthepcDNA—wFAPaastemplateand clonedintothesamevector Results TheconsturctionofpcDNA —wFAPot，pcDNA —tFAPotandpcDNA —mFAPotwas confirmedbyenzymedigestionandDNA sequencing．Conclusion Theeukaryoticexpressionplasmidshavebeencon· sturctedsuccessfully，which：laysimportantfoundationforthefutureresearchonthemoleculra mechanism ofFAPainoral squamouscellcarcinomacarcinogenesis． 【Keywords】 fibroblastactivationprotein仅；eukaryoticexpressionplasmids；pcDNA3．1(+) 口腔鳞癌 (oralsquamouscellcarcinoma，OSCC)占 野生型FAPot(wFAPct)、胞外段 FAPot(tFAPot)和缺失 口腔颌面部恶性肿瘤的90％以上 ，发病率有持续上升 624～704位氨基酸的突变型 FAPot(mFAPct)真核