人谷胱甘肽硫转移酶P1基因真核表达体系的构建及在A549细胞中的表达.pdfVIP

· 42· 塑 ! 堂堂塑(匡堂 2 QQ 生 旦 笫43卷 第1期 人谷胱甘肽硫转移酶P1基因真核表达体系的构建及在A549 细胞中的表达 木 王 琳 ’△ 刘新奎 ’ 吴逸明 1)郑州大学公共卫生学院职业卫生与职业病学教研室 郑州450001 2)郑州大学第一附属医院信息科 郑州450052 △女，26岁，博士研究生，研究方向：职业性肿瘤的预防与控制，E-mail：wanglin7898@gs．zzu．edu．cn #通讯作者，男，61岁，教授，博士研究生导师，研究方向：职业性肿瘤的预防与控制，E-mail：wuym@zzu．edu Cn 关键词 谷胱甘肽硫转移酶P1；真核表达；基因；转染 中图分类号 Q78 摘要 目的：构建人谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)基因的真核表达载体，转染 A549细胞，实现其真核表达。 方法：以本室保存的重组质粒(pMAL—C2x—GSTP1)为模板；根据 GSTP1全基因组序列设计GSTP1 PCR引物，扩增 GSTP1片段；限制性内切酶酶切PCR产物和pcDNA3．0空质粒，T4 DNA连接酶连接酶切产物，重组质粒转化E．coli DH5ct；提取质粒经酶切、PCR和序列测定后，用Primer Premier 5．0进行序列分析。测序正确的重组质粒和空质粒 用脂质体转染法分别转染A549细胞，经G418筛选，获得阳性克隆，运用RT．PCR、Western Blot等技术进行鉴定，同 时观察细胞的生长变化。结果：质粒酶切电泳和特异 PCR均可见0．63 kb的目的基因片段，测序结果与 GenBank 中人GSTP1序列一致，基因登录号：BC010915。成功转染A549细胞，实现表达，获得GSTP1蛋白。结论：成功构建 pcDNA3．0·GSTP1真核表达细胞系，为进一步研究其在解毒致癌原、预防肺癌发生及其与职业性肺癌的关系奠定了 基础。 Construction of eukaryotic expression vector for human glutathione··S·· transferase P1 gene and expression in A549 cell line WANG Lin 。LIU Xinkui ， Yiming ) J)Department of Occupational Health and Occupational Medicine，College of Public Health，Zhengzhou University，Zhengzhou 450001 2)Information Section of the First Affiliated Hospital，Zhengzhou Universi— ty，Zhengzhou 450052 Key WOrds GSTP1；eukaryotie expression；gene；transfeetion Abstract Aim：To construct an eukaryotic expression vector carrying human glutathione—S·transferase P1gene (GSTP1)and traBSfect it t0 A549 cells．Methods：Genomic DNA was isolated from the recombinant plasmid(pMAL·C2x— GSTP1)，then GSTP1 gene was amplified by PCR．DNA fragment of GSTP1 and eukaryotic vector pcDNA3．0 were digested bv the same restricti0n endonucleases and linked by T4 DNA ligase．The positive recombinant plasmid was transfected into A549 ce11s．RT—PCR and Western Blot identified the positive clones．Results：The recombinant plasmid could be digested