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不同厂家清开灵注射液指纹图谱探究 姚金成　赵绪元　瞿延晖　胡　领 摘　要：目的：比较不同厂家清开灵注射液的HPLC指纹图谱。方法：选择NUDEOSIL－C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相(A)甲醇-(B)0.5％醋酸梯度洗脱，运行时间65min，检测波长255nm，测定清开灵注射液的指纹图谱。结果：标示出清开灵注射液17个共有峰，以黄芩苷作为参照峰，得出共有峰的相对保留时间和相对峰面积，用中药指纹图谱相似度计算软件计算得出其相似度在0.9以上。结论：不同厂家清开灵注射液的指纹图谱基本一致。可以利用指纹图谱对其进行质量控制。 关键词：清开灵注射液；指纹图谱；HPLC 清开灵注射液由安宫牛黄丸经拆方而来，它由黄芩苷、栀子、金银花、水牛角等7味中药提取制成，具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的作用，用于热病神昏，中风偏瘫，神志不清等症。按国家药品监督管理局颁发的关于中药注射剂指纹图谱研究的技术要求，本文建立了合适的方法对不同厂家清开灵注射液进行指纹图谱测定，用中药指纹图谱相似度计算软件，对所得的指纹图谱进行了相似度的计算。 1　仪器与试剂 1．1仪器岛津LC-10A系列高效液相色谱仪(含LC-10ATVP泵，LC-10Ai泵，SPD-M10AVP检测器，CTO-10A柱温箱，Class-vp工作站)。 1．2试剂和样品 甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所，清开灵注射液为4个不同厂家提的12批产品。 2 方法与结果 2．1样品的制备取清开灵注射液适量，用50％甲醇稀释，通过0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液；取黄芩苷对照品适量，加50％甲醇溶解，制成含黄芩苷100μg/mL的溶液，作为对照品溶液。 2．2色谱条件及分析方法色谱柱：NUDEOSIL-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)流动相：(A)甲醇-(B)0.5％醋酸，梯度洗脱：0min：10％甲醇，50min：100％甲醇，65min：100％甲醇；检测波长：255nm；流速：1.0mL/min；柱温：40℃，进样量20μL。 2．3精密度试验取同一批号供试品溶液，连续进样6次，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致，其相似度均大于95％，符合指纹图谱研究技术的要求。 2．4稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24h检测，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致，其相似度均大于95％，符合指纹图谱研究技术的要求。 2．5重复性试验取同一批号供试品6份，按2．1项下制备供试品溶液，分别进样检测，结果表明，指纹图谱中各共有峰相对保留时间和峰面积基本一致，其相似度均大于95％，符合指纹图谱研究技术的要求。 2．6样品测定取12批清开灵注射液，分别按供试品的制备方法制备供试液并检测，用中药指纹图谱相似度计算软件进行了分析，以黄芩苷的色谱峰为参照物峰，其相对保留时间为41.9min，标示了清开灵注射液中17个共有峰，(S1-S3，S4-S6，S7-S9，S10-S12分别为4个不同厂家的3个批号产品的色谱图)，其相对保留时间与相对峰面积。 3　讨论 色谱柱的选择：本实验比较了3个不同厂家的色谱柱，NUDEOSIL―Ct8柱(250mm×4.6 mm，5μm)，PHENOMENEX―C1818柱(250mm×4.6mm，5μm)。SINO-CHROM ODS(200mm×4.6mm，5μm)，SINOCHROM DOS色谱柱的柱效较差，大多数峰不能分开，NUDEOSIL―c18柱和PHENOMENEX―c18柱的分离情况相近，综合考虑，选用NUDEOSIL-C18柱作为本实验的色谱柱。 流动相的选择：本实验先采用了等度洗脱，发现用强洗脱能力的流动相时，出峰时间很早，且峰不能很好的分开，再用弱洗脱能力的流动相时，出峰少，且出峰时间太迟；故采用梯度洗脱，分别使用了乙腈一水，乙腈-0.5％磷酸。乙腈-0.5％醋酸，甲醇一水，甲醇-0.5％磷酸，甲醇-0.5％醋酸作用流动相进行线性梯度洗脱，发现用洗脱能力较弱的甲醇时峰的分离情况较乙腈好，在水相中加入磷酸或醋酸后，出峰明显增多，峰有较大的改善，而用醋酸时的基线较磷酸时平直，综合考虑，选用甲醇-0.5％醋酸线性梯度作为本实验的流动相。 检测波长的选择：本实验设定检测器从200-360nm波长范围内进行测定，在低波段230nm以下时，色谱图的基线有较明显的飘移，而270nm以上时色谱峰明显的减少，故本实验选用了255nm作为指纹图谱的检测波长。 柱温的选择：实验发现柱温在30℃以下时，内标物黄芩苷色