定心胶囊对房颤大鼠心房肌组织Ca2+-ATP酶及Cx40基因表达影响实验探究.docVIP

定心胶囊对房颤大鼠心房肌组织Ca2+-ATP酶及Cx40基因表达影响实验探究摘要：目的：探讨中药定心胶囊对房颠大鼠心房肌组织ca2+－ATP酶及缝隙连接蛋白加(Cx40)基因表达的影响，揭示益气养阴活血中药定心胶囊预防和治疗房颤的作用机理。方法：采用氯化钙－乙酰胆碱混合液以鼠尾静脉给药的方式建立房颤的动物模型。筛选具有典型房颤心电图表现的大鼠，随机分为房颤模型组、定心胶囊治疗组、雏拉帕米对照组、加正常对照组，共4组。定心胶囊治疗组、维拉帕米对照组给药治疗，4周后，测定心房肌组织中Ca2+－ATP酶及Cx40基因表达。结果：①治疗组(包括西药、定心胶囊组)与模型组比较能明显升高心房肌组织Ca2+－ATP酶基因表达及降低cx40基因表达(PO.05)。说明两组有显著性差异。②定心胶囊组与西药对照组比较p0.05，说明定心胶囊治疗组的疗效优于维拉帕米对照组。结论：定心胶囊组能够明显改善房颤大鼠心肌组织Ca2+－ATP酶及Cx40基因表达，说明了益气养阴活血中药对房颤有一定的治疗作用。 关键词：定心胶囊；房颠；Ca2+－ATP醇；缝隙连接蛋白40(Cx40) 中图分类号：R－33 文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)0l－0013－03 心房颤动(atrial fibrillation，AF)是心律失常的一种，发病率较高。具有较高致残、致死率，而心房电重构和结构重构是房颤的主要发病机制。因此，通过调节心房重构和结构重构，达到预防和治疗房颤的作用显得至关重要。本实验通过进行房颤大鼠的造模，给予中药定心胶囊，对照药维拉帕米，并且有模型组和空白组4组之间的比较研究，观察房颤大鼠心房肌组织Ca2+－ATP酶及Cx40基因表达的变化，探讨定心胶囊预防和治疗房颤的作用机制。 1　材料和方法 1.1　动物模型的建立及分组选择体重250－300g健康Wistar大鼠100只，雄性，清洁级。随机分为正常对照组(10只)及造模组(90只)。采用氯化钙一乙酰胆碱混合液以鼠尾静脉给药的方式建立房颤的动物模型。取1只大鼠，称重，用3％的戊巴比妥钠30mg／(kg)进行腹腔注射麻醉，待老鼠昏迷后将其仰卧位固定在木板上，先描记大鼠的正常心电图(记录标准肢导联，见图1)。将其尾部的鳞毛刮干净后注射氯化钙－乙酰胆碱混合液1mL／kg(每毫升中含：Ach 33ug，cacl2 10rag，新鲜配制)，用针形电极刺入四肢，描记大鼠此时的心电图(记录标准肢导联，见图2)。房颤大鼠，分笼饲养，常规喂养饲料与水，连续给药4周后，停药后做心电图(记录标准肢导联，见图3)。心电图有典型房颤改变者为房颤成功模型。 从图1－3，可以明显看到大鼠造模后心电图的改变，P波消失，代之以f波的房颤图形。说明大鼠房颤造模成功。 造模成功大鼠，随机分为AF模型组、定心胶囊治疗组、维拉帕米对照组，加正常对照组，共4组，平均每组8只大鼠。 正常组、模型组每日1次灌服同等容积的生理盐水；益气养阴活血中药定心胶囊治疗组：灌服相当于16.2／(kgd)生药的定心胶囊，每日2次；西药对照组灌服相当于4.5mg／(kgd)生药的维拉帕米，每日2次。共用药4周。4周后测定各组大鼠心房肌组织Ca2+－ATP酶及Cx40基因表达情况。 1.2　定心胶囊的制备药物组成：生地、人参、炙甘草、麦冬、丹参等共计8味中药。定心胶囊由辽宁中医药大学附属医院药剂科制备，制成定心胶囊蒸馏水溶液。 1.3　心肌组织Ca2+－ATP酶及Cx40基因表达的测定动物各组用药4周后，用3％戊巴比妥钠麻醉状态下，打开胸腔，取出心脏，在心房肌组织取出4块约50mg心肌组织，于液氮中冷冻后在－70℃条件下保存，采用RT－PCR方法测定心肌组织Ca2+－ATP酶及Cx40基因表达的变化情况。 1.4　数据处理所有实验数据，计量资料均用均数±标准差(x±s)表示，用SPSS统计软件11.0版本，组间比较用方差分析，若方差不齐采用Dunnett检验。 2　实验结果 2.1　各组大鼠心肌组织Ca2+－ATP酶基因表达的变化情况用liT―PCR方法测定Ca2+－ATPmRNA和B－actln表达，并对liT―PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，产生了2条光带，见图4：上面是Ca2+－ATP mRNA表达情况，而下面是B―actin表达情况。再计算Ca2+－ATP mRNA／B―actln的灰密度比值，进行组间比较，如表1所示。 由表1可见：模型组与正常组比较，有显著性差异(P0.01)，说明模型组大鼠Ca2+－ATP酶基因表达较正常组有统计学意义。中药组和西药组与模型组比较，P0.05，有统计学意义，但中药组和西药组比较，中药组疗效优于西药组(PO.05)