高效液相色谱法测定女贞子中特女贞苷含量实验探究.docVIP

高效液相色谱法测定女贞子中特女贞苷含量实验探究【中图分类号】R91 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)07－0356－02 【摘要】目的 建立高效液相色谱法测定女贞子中特女贞苷的含量的方法。方法 采用Alhima Cl8色谱柱 （4.6 mm × 250 mm，5 μm），乙腈-水为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长230 nm，柱温25℃。在此色谱条件下，对女贞子中特女贞苷含量进行测定。结果 该方法在 0.05-0.4mg/ml 范围内线性关系良好，回收率为 99.27 %，RSD为 0.87%，女贞子中特女贞苷的平均含量为 9.39 mg/g。结论 该方法简便、准确，重复性好，可用于控制女贞子的质量。 【关键词】女贞子；特女贞苷；高效液相色谱法 女贞子为木犀科植物女贞（Ligusrtum Lucidum Air.）的干燥成熟果实，又名女贞实、桢木、冬青子等，广泛分布于我国山东、安徽、浙江、江苏、湖南等地［1］。《神农本草经》谓其“味苦平，主补中，安五脏，养精神，除百病”，是扶正固本补益类药物中的上品［2］。2005 版《中国药典》记载其功能与主治为“滋补肝肾。明目乌发。用于眩晕耳鸣，腰膝酸软。须发早白，目睛不明”［3］。现代药理学研究表明其具有增强免疫功能，降低血糖，抗菌消炎，抗癌等药效［4］．迄今为止，国内外学者对女贞子的化学研究已经取得很大进展，共分离和鉴定出 100 多种化合物，主要有齐墩果酸等三萜类脂溶性活性成分、裂环环烯醚萜苷类和对羟基苯乙醇苷类等水溶性化学成分,以及磷脂、多糖、挥发油、微量元素等多种化学成分，其中特女贞苷是女贞子中的主要药效成分之一［5］。目前，国内外有关特女贞苷检测方法的报道较少，本文旨在建立高效液相色谱法测定女贞子药材中特女贞苷含量的方法，以期为其药材质量评价提供依据。 1材料 1. 1仪器:美国 Waters 600 E-486 高效液相色谱仪，含在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器、化学工作站；美国 Bransonic 超声清洗仪，德国 Sartorius CPAl24S 型电子天平。 1. 2药品与试剂:特女贞苷对照品，纯度 98％，由上海中药标准化研究中心提供。女贞子药材为市售经广州中医药大学中药学院鉴定为木犀科植物女贞（Ligustrum lucidum Ait.）的干燥成熟果实，经 50 ℃ 干燥后，粉碎，过 60 目筛，备用。甲醇及乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱分离和检测条件:色谱柱为Alhima Cl8 （4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0 - 40min，15％A → 40％A）；流速为1.0 ml/min；检测波长为 230 nm；柱温 25 ℃；进样量为 10 μl；采集时间为 40 min。在此色谱条件下，特女贞苷和前后色谱峰可达到基线分离。 2.2对照品溶液制备:精密称取特女贞苷对照品10.0 mg，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为1.0 mg/ml对照品溶液。 2.3供试品溶液制备:女贞子药材经粉碎处理，取药材粉末（60 目筛）约 0.2 g，精密称定，置于锥形瓶中，加甲醇 50 ml，超声处理 30 min，取出，放冷，再称定质量。用甲醇补足减失的质量，摇匀，用孔径为 0.45 μm 微孔滤膜过滤，收集滤液。精确吸取滤液10 ml，转移至100 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，用孔径为 0.45 μm 微孔滤膜过滤，即得供试液。 2.4线性范围考察:分别精密吸取对照品溶液 0.25，0.5，l，2，4 ml，置于10 ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列对照品溶液。精密吸取上述溶液各 10 μl，分别进样，在上述色谱条件下平行测定3次。以对照品溶液浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线。回归方程、相关系数及线性范围分别为：Y=1.1063 × 104X + 3.274 × 103，r = 0.9999。线性范围为0.05-0.4 mg/ml。 2.5精密度试验:精密吸取特女贞苷对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样 6 次，计算特女贞苷峰面积 RSD 为 1.18 %，结果表明精密度良好。 2.6稳定性试验:精密吸取供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，12 h 进样，测定特女贞苷的色谱峰面积值，RSD = 1.53 %，结果显示供试品溶液在 12 h 内稳定。 2.7重复性试验:精密吸取供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样 6 次。结果特女贞苷峰面积的 RSD = 2.60 %，本法测