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探析用高效液相色谱测定乳制品中三聚氰胺方法
探析用高效液相色谱测定乳制品中三聚氰胺方法摘要:目的 探讨利用高效液相色谱办法(HPLC)测定乳制品中三聚氰胺含量的效果。方法 采用高效液相色谱设备,对乳制品样品前处理实行优化,色谱柱设定为Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相是离子对缓冲溶液和乙腈,流速为1.0 mL/min,检测波长是236 nm。结果 三聚氰胺于0.5~120 mg/L的阶段线性关系相关性较高,检出的最低限度为0.5 mg/kg,相对标准偏差RSD是1.406%,回收率是100%~105%。结论 HPLC重复性强,灵敏度高,准确度高,测定乳制品中三聚氰胺的操作快速、简便、成本低而且准确性高,比较适合于大批量样本的快速测定。
关键词:高效液相色谱 测定 乳制品 三聚氰胺
1、前言
随着社会经济的迅速发展以及人们生活水平的不断提升,人们关于食品安全的意识和要求越来越高。牛奶作为一种增强体质和增强营养的重要食品,其品质安全更是受到了食品安全机构以及全民的关注。尤其是在2008年9月份,我国发生了“三鹿奶粉”三聚氰胺超标食品特大安全事故,导致多名儿童死亡或者病重。而事发两年后,我国吉林、甘肃、青海等多省的乳制品(主要是奶粉)又检测出三聚氰胺超标,其中青海一家乳制品厂出品的奶粉检出三聚氰胺超标高达500倍[1]。这些三聚氰胺事件不断地敲响了我国食品安全的警钟,促使国家食品安全机构尽快就此事作出处理,建立完善的乳制品安全监测体系,因此如何快速有效地测定乳制品中的三聚氰胺,成为目前研究的热点。本文主要探讨利用高效液相色谱办法(HPLC)测定乳制品中三聚氰胺含量的效果,结果显示该办法准确度和灵敏度均较高。现报告如下。
2、一般资料和方法
2.1研究对象与设备、试剂
乳制品:我省某乳制品公司送检的奶粉抽样。
设备:采用美国安捷伦科技有限公司生产提供的1200液相色谱仪,配套二极管阵列检测器使用,此外,此系统还配四元泵、自动进样器和色谱数据处理工作站等;色谱柱为Eclipse XDB)C18(250 mm×4.6 mm,5μm);AgilentSCX 60 mg,30 ml混合型阳离子交换固相萃取柱;氮吹仪。
试剂:三聚氰胺标准品,纯度是99. 99%。庚烷磺酸钠,色谱纯,其纯度为99. 80%左右,为美国进口分装;乙腈、超纯水与甲醇均为色谱纯,其中甲醇溶液的体积分数为50%,氨化甲醇溶液的体积分数为5%,醋酸铅溶液的质量分数为2%,乙酸溶液的质量分数为1%,其他的试剂都是分析纯。
工作液和标准储备溶液的配制:取乙腈—超纯水(80+20)混合液稀释成适用的浓度,即是工作溶液;准确地取三聚氰胺标准品100 mg,再取乙腈—超纯水(80+20)的混合液将三聚氰胺标准品溶解,定容到100 mL,进而配制成1000 mg/L的标准储备溶液,并储存于4℃的温度环境中[2]。
2.2色谱条件[3,4]
色谱柱:Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5μm);
流动相:准确称取2.02 g的庚烷磺酸钠及2.10 g的柠檬酸,加纯水定容到1 L,此为A液。B液是乙腈,A液和B液的混合比例为(体积比)=95∶5;
色谱柱温度:30℃;
流速:1.0 mL/ min;
检测波长:236 nm;
进样量:10μL。
2.3试验方法
样品制备:准确取奶粉3.5 g(精确至0.01 g),将其放在50 ml的具塞刻度试管内,加2 m L的乙酸铅、三氯乙酸 (10g/L)、5 ml水定容,漩涡振摇大约1min之后,加入乙腈40 mL,超声操作20min,移放到50 mL的离心管,加水到刻度,漩涡振摇2 min后,进行8 000 r / min 离心5min,等待净化,后取上层清液过0.45μm的滤膜,过滤液利用液相色谱仪进行测定。
3、结果
3.1提取溶剂的选择
本研究采用了水、乙腈以及水—乙腈等作为提取溶剂。三聚氰胺能够溶于乙腈,所以利用乙腈作为提取试剂时,溶解的杂质相对较多,因此很易生成干扰峰[5];利用水作为提取溶剂时,也因为三聚氰胺微溶于水,会对回收率产生轻微的干扰。所以利用这种提取溶剂的特性,将其制成一定比例的混合液,当乙腈含量是80%时,研究中三聚氰胺的回收率高达95%,而且沉淀蛋白效果理想,因此最终确定使用腈—水(80+20)的混合液作为提取溶剂。
3.2蛋白沉淀技术的选择
本研究使用乙酸铅作为蛋白沉淀试剂,研究结果显示,此蛋白沉淀技术效果理想,而且成本较低。该技术操作中的8 000 r / min 离心5 min相比于4 000 r / min离心10 min的操作,直接离心过滤膜,即是样品中的脂肪含量比较高,也能在操作中直接形成相对较
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