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DNA复制过程需要DNA连接酶吗？ 复制方向：DNA聚合酶只能从子链的3’端添加单个的脱氧核苷酸。 冈崎片段的连接需要连接酶。 Ca+处理细菌细胞可以使细胞处于感受态，易于转化。感受态什么意思？细菌可遗传变异的来源只有基因突变吗？ 转化是细菌的一种基因重组的方式，可增加细菌的变异性，增强群体的适应性。 在细菌生长的某阶段，会有一个容易接受外源DNA的阶段，称为感受态。也可以通过人为处理促使其达到感受态。 认为细菌可遗传变异的来源只有基因突变是错误的。 添加蛋白酶的洗衣粉不能洗涤毛丝织物，而添加纤维素酶的洗衣粉为何能洗涤棉织品？ 成熟的棉纤维主要成分是纤维素。 纤维素酶包括：内切酶（是纤维素分子断裂成片段）、外切酶（从纤维素分子的糖链末端切掉两个葡萄糖分子，产生纤维二糖）、葡萄糖苷酶（使纤维二糖分解成葡萄糖）。 20世纪80年代，日本的一家公司首先推出含有纤维素酶的洗衣粉。纤维素酶本身不能去除污垢，但可以去除棉纺织品表面的浮毛以及面附着的沉积性顽顽渍，同时可以使纤维结构变得蓬松，进而使渗入到纤维深处的尘土和污垢能够与洗衣粉充分接触，进而达到更好地去污效果。 所以使用含有纤维素酶的洗衣粉可以使棉纺织品增艳出新、柔软蓬松、织纹清晰、色泽鲜艳。 但过量、超时、反复使用这种洗衣粉，也会损伤棉麻等天然纤维织物。 为什么抗病毒植物一般转移病毒的外壳蛋白基因？ 这样，抗病毒植物的细胞中就会存在大量病毒外壳蛋白，当病毒的核酸侵入到植物细胞时，外壳蛋白就会迅速将其包裹起来，从而阻止病毒核酸的复制和翻译。 转入病毒复制酶基因的植物为什么可以抗病毒？ 复制酶即特异性依赖于病毒RNA的RNA多聚酶。 转入的复制酶基因均切除了复制酶活性中心部位对应的核苷酸序列，表达的这些蛋白产物会干扰病毒复制过程中复制酶复合体的形成及其功能的行使，从而使工程植株具有抗病性。 3.dNTP的生成需要ATP供能 dNTP由dNDP的生成过程也需要ATP供能： 　　dNDP+ATP→dNTP+ADP 如：GDP+ATP→GTP+ADP 　　CDP+ATP→CTP+ADP 4.DNA的复制： 3’-OH进攻5’- ?Pi；DNA聚合酶催化；DNA的延伸方向:5’→3’ 5.引物 PCR反应体系中所需引物为单链DNA片段，一般为20—30个核苷酸长度。可以与待扩增基因母链一端互补配对。所以，待扩增基因应有一段已知序列。 引物可以人工设计合成。 6.引物、dNTP需要随时添加吗？ 反应前需要加入足量的引物，一般达到0.25μmol/ L 反应前需要加入足量的dNTP，一般达到200μmol/ L 这样就足够反应进行30--40次循环。 7.酶、模板需要随时添加吗？ 模板102—105 ----每次循环均可利用上一次合成的DNA作为模板 2.5个单位的DNA聚合酶 ----酶可以重复利用 引物分子较小，运动较快，和母链碰撞的机会要多得多，所以优先与母链结合？而不是两条母链结合。 8.退火时为何引物优先与母链结合？ 9.DNA的复制 和 体外的模拟 模板（母链） 细胞内源 外源加入 打开双链 解链酶 加热变性 维持单链 单链结合蛋白 高温 引物 引物合成酶 外源加入 底物dNTP 细胞内源 外源加入 聚合酶 细胞内源 外源加入 反应环境 细胞内环境 缓冲液 PCR循环--变性 PCR循环--变性 PCR循环--变性 PCR循环—退火 PCR循环—延伸 PCR循环—延伸 PCR循环—延伸 PCR循环—延伸 DNA测序 双脱氧链终止法 双脱氧链终止法原理 如果此处没有羟基，则不能继续增加脱氧核苷酸。脱氧核苷酸链不能继续延长。 O 碱基 C P OH H 1 2 3 4 5 O 碱基 C P OH H 1 2 3 4 5 OH 脱氧核苷酸的连接 O 碱基 C P O H 1 2 3 4 5 O 碱基 C P OH H 1 2 3 4 5 H2O 脱氧核苷酸的连接 O 碱基 C P H H 1 2 3 4 5 O 碱基 C P OH H 1 2 3 4 5 OH × 双脱氧核苷酸… ? 1--dATP, dCTP, dGTP, dTTP. + ddATP 2--dATP