流行性出血热患者尿液中融合细胞的检测及其意义.PDFVIP

维普资讯 第6卷第2期 囊 毒 学 素 言 Yo1．6H●．9 1991年6月 VIROLOGICA SINICA J- ．1991 流行性出血热患者尿液中融合细胞的检测及其意义 马立宪 倪大石 ‘董朝阳 王灵枢 ‘ (山束医科大学珏防医学系 苷}南2500~) 台l譬30061) 摄 l 我们寝察刊流行性出血热患者尿液中的 ·多核巨捆胞。并非是上皮捆 胞脱落 后昀儡 然堆税，而是细胞之问发生了融台。经免疰组化染色发现所有融合细胞内均有特异性EHie 病毒抗原颗粒。提示流行性 出血热病毒的直接作用与屎液中融合细胞 的形成有关。 关■调：流行性 出血热 融台细胞 幕液 病毒抗原 免疫组化 早在|0年代就有^报道在流行性出血热 (以下简称 EHF)患者尿液中发现成堆的， 巨大的上皮样空泡细胞和巨大细胞，并提出这种细胞对 EHF的诊 断可能有意义Ⅲ。 苏 联学者曾将上述细胞称为空泡性上皮细胞聚合体 (Aggregateofvaeuo]atedEpithelia] Cello[|】。我国 1976年也在 EHF患者尿液中盎到一种由移行上皮细胞遇变而形成的 多 接 巨细胞 ¨]。虽然各家对这种细胞命名不一，但所描述的细胞形态到基本相似，并观 察到这种细胞在病后 3～ 4天的患者尿液中查出，至10天左右检出率最高，二周后随着 肾功能的恢复而消失。1981年后我国相继分离 EHF病毒成功l。从而使我们 能够对这 种细胞进行抗原检查，以期探讨融合细胞形成的原因和在EHF病毒致病机理中的意义。 我们于1989年l2月至1990年 1月在安徽省阜阳、利辛两地对 22例 EHF患者进行了尿液 脱落细胞的检查．现将分析报道如下， 材 料 与 方 法 一 ， 刍债■蠢EHF童■ 累用ALC¨．RIi，阵椿，H5，c·辱．多糠霸毒穗台免疫家杰而剖 备。由安t省医学科拳研究所提供，使用时1；4O■释。 ：，聋千●曩过一化●一标记羊抗曩i9G抗体 由北京生物翻品研究所生产。 兰 ，童■ 3．3氨基联苯胺 (DAB)，化学纯，由北京化工厂剖。 霸，■倒鼍摔 经临床和血清特异性IgG抗体＆铡效价大予1；160而确诊的EHei患者22倒。男 l8僻 ，女4佣．年龄24~61岁。共收集尿液标本38份。 五 ，对量丑 为了证实其特异性，采用i0例其他患者屎液标本作对照 (慢性 乙肝5例 ，营痢 3 饵，上呼吸道感染2倒 )。此外，取两张VetoE4细胞片，其中一张为EHF抗原片，男一张为正常 奉文于1∞睥 6月25日收到．1柏睥 9月26日恪圜 维普资讯 1l8 翥 毒 学 志 杂 第6卷 壹田囊片，与上述标本 同时用 同样方法检测。凡屎 中捡 出融合}田胞者每五天复查一次。 六、方洼 屎藏处理：取患者新鲜屎液乎10ml试管中离心沉淀 (2O00r／m 10’)。弃上滑 ， 将沉淀物用pH7．20．0tmol／LPBS挠三次。最后一次弃上精，用 0．s皿l生理盐水将沉淀物轻轻吹 打涓 向后滴乎玻片，置室温干燥后甩冷丙酮4℃固定1O分钟 ，吹干待柱。 竟疫霉化染色：将上述处理过的尿液鲴跑和对照细胞片用PBS挠一次，加 i和小牛血蒋，放置 ~37C承}苷糟率2O分钟，以阻断非特异性扮染色。PBS撮挠后加0．5 过氧化氢丙酮宣温_F80分钟 椰{融内杯柱过氧化物酶。PBS振抗，如第一抗俸 (多价盘抗EHF抗体 )湿盒内4℃过夜。PBS~4次 后加第=抗体 (羊抗盎IsG)37~C2小时。PBs洗5次后加底物DAB，室温下iO分钟。PBs冲洗， 甲 基绿复染l5分钟．谴纸