白花蛇舌草中熊果酸微波辅助提取工艺探究.docVIP

白花蛇舌草中熊果酸微波辅助提取工艺探究摘要：采用微波辅助乙醇浸提法提取了白花蛇舌草中的熊果酸，并用分光光度计对其含量进行了测定，通过正交试验对其提取工艺进行了优化。结果表明，微波辅助法提取白花蛇舌草中熊果酸的较佳工艺条件为：乙醇浓度85％、微波功率为400W、微波时间为5min、液料比22：1、微波温度为50度。在此条件下，熊果酸的提取率达0.4088Z。 关键词：白花蛇舌草；熊果酸；微波辅助；提取工艺 前言 白花蛇舌草又名蛇舌草、蛇总管、羊须草等，是茜草科耳草属的植物。研究表明，其主要功效是消痛散结、清热解毒、利尿除湿等，具有很高的药用价值；主治恶性肿瘤、多种类型的炎症、毒蛇咬伤等疾病，在临床上被广泛应用。 熊果酸(UA)是白花蛇舌草中主要的活性物质之一，有镇静、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗糖尿病、降低血糖等功效，显著的抗癌和免疫功效，有望成为低毒、有效的新型天然抗癌药物。熊果酸还具有明显的抗氧化功能，在保健、化妆品等领域得到了广泛的应用。本文采用微波辅助法提取蛇舌草中的熊果酸，用分光光度计测其含量，通过单因素和正交试验分析考察，确定较佳提取条件为白花蛇舌草进一步研究开发利用提供依据。 1　材料试剂与仪器 1.1　材料试剂 白花蛇舌草药材(购置于汉中市健康大药房)。 熊果酸标准品(西安小草植物科技有限公司)；无水乙醇、乙酸乙酯、冰醋酸、香草醛、高氯酸等均为分析纯。 1.2　仪器 WF－2000型微波快速反应器(上海屹尧分析仪器有限公司)；721分光光度计(山海精密科学仪器有限公司)；Cary 50紫外一可见分光光度计(美国瓦里安公司)；DGG-9140B型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)；GR 200电子天平(日本AND)；HH-2型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)；SHZ D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；FW177型粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)等。 2　实验方法 2.1　白花蛇舌草中熊果酸的提取 将白花蛇舌草药材干燥后经粉碎机粉碎，过60目筛，置于60度恒温干燥箱中干燥至恒重。准确称取1.000g样品粉末，置于聚四氟乙烯消解罐中，加入一定体积的乙醇溶液，搅拌，置于微波反应器内，在一定功率下微波一段时间，冷却后抽滤，得到熊果酸提取液。 2.2　检测波长的确定 准确称取干燥至恒重的熊果酸标准品10mg，置100mL容量瓶中，用85％的乙醇溶解并定容至刻度，即得0.1mg／mL的熊果酸标准溶液。 精密量取0.5mL该标准品溶液，同时量取2.1实验得到的熊果酸提取液0.5mL，分别置于5mL具塞试管中，减压蒸干乙醇后，加0.3mL5％香草醛一冰醋酸，0.7mL高氯酸。在60度水浴中加热15min，取出放冷至室温。用乙酸乙酯定容至刻度线，摇匀。用Cary-50紫外分光光度计进行紫外扫描测定，如图1和图2所示。 观察图1和图2可发现，熊果酸的标准品溶液和白花蛇舌草中提取液均在548nm波长处出现明显的最大可见光吸收，故可判断出白花蛇舌草中的提取物含有熊果酸，因此选择波长为548nm作为检测波长。 2.3　标准曲线的绘制 准确称取熊果酸标准溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8 mL、0.9 mL、1.0 mL置于5mL具塞试管中，减压蒸干后，加0.3mL5％香草醛冰醋酸，0.7mL高氯酸，于60度水浴中加热15min后，冷却至室温，用乙酸乙酯定容至刻度线，摇匀。同时以未加标准品溶液作空白，在波长548nm处测定吸光度。以熊果酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为：y=0.0373x―0.0931，R2=0.9953，其线性范围为8ug／mL～20ug／mL。 2.4　熊果酸含量的测定 准确吸取2.1实验得到的样品提取液，按照2.3方法步骤在波长548nm处测定吸光度，并结合线性回归方程求其含量，计算熊果酸提取率。 3　结果与讨论 3.1　实验条件的确定 3.1.1　乙醇浓度的确定 在微波功率400W、液料比20：1(mL／g)、微波温度50℃、微波时间5min的条件下，分别用乙醇浓度为70％、75％、80％、85％、90％按2.1进行实验，计算熊果酸提取率，结果如表1所示。 表1表明，熊果酸提取率随着乙醇浓度的增大先增加后又下降。当乙醇浓度增大到85％时，提取率达到最大；随着乙醇浓度的继续增大，一些醇溶性物质得到游离，溶出量增大，导致熊果酸的提取率下降。故选择乙醇浓度为85％为宜。 3.1.2　液料比的确定 在乙醇浓度为80％、微波功率400W、微波温度50℃、微波时间5min的条件下，液料比