口蹄疫病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立.pdfVIP

第 36 卷第12 期 中国预防兽医学报 Vol. 36 ,No.12 Dec. 2014 2014 年 12 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine doi: 10.3969/j .issn.l008-0589.2014.12.08 口蹄疫病毒 TaqMan 荧光定量 PCR 检测方法的建立 胡晓亮口，姜蓦1 ，仇铮1 ，郭东春 1 ，刘家森 l ，林欢1 ，刘培新 l ， 回 进 1 ，李志杰 l ，刘大飞 l ，刘春国 1 ，曲娟娟 2 ，曲连东 1 ， 3* (1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室，黑龙江哈尔滨 150001; 2. 东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨 150030; 3. 东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨 150030) 摘 要:为建立检测口蹄疫病毒(FMDV)的方法，本研究根据 GenBank 中 FMDV 的 2B 基因序列，设计合成 一对引物和一条 TaqMan 探针，将 2B 基因克隆到 pBlue8cript8K(-)载体中，利用 T7 体外转录试剂金制备标准品， 2 拷贝 通过优化反应条件，建立了 TaqMan 荧光定量PCR 检测方法。结果表明，该检测方法的敏感性达到 10 L; /μ 与其它主要相关病毒均不发生交叉反应，批内和批间试验重复性的变异系数(CV)均小于 3%。本研究建立的 FMDV TaqMan 荧光定量 PCR 方法对FMDV 的快速检测具有重要意义。 关键词:口躇疫病毒; TaqMan 探针;荧光定量 PCR 申图分类号: 8852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2014)12-0948-04 Development the real-time RT-PCR assay for detection of foot-and-mouth disease virus 1 1 1 1 1 HU Xiao-liang 气 JIANG Qian , QIU Zheng I, GUO Dong-chun , LIU Jia-sen I, LIN Huan , LIU Pei-xin , 1 1 1