小鼠IL-6、iNOSTaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

小鼠IL-6、iNOSTaqMan荧光定量PCR 检测方法的建立及应用 施开创1陈宏备2胡杰1覃芳芸1郑喜邦2李军1 1.广西动物疫病预防控制中心，广西南宁 530001 2.广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005 摘要：为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后IL-6、iNOS基因的表达水平，从分子水平深入研究EMCV的致病机制，分别 针对小鼠IL-6、iNOS及管家基因β-actin的基因序列设计特异性引物和探针，构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳 性标准品，建立了检测IL-6、iNOS和β-actin的TaqManreal-timePCR检测方法。该方法线性关系好，IL-6、iNOS和β-actin标 准曲线的相关系数均达到0.998；敏感性高，初始模板的检出下限均达到1×101拷贝/μL；特异性强，只有以总RNA反转录成 的cDNA为模板，并加入特异性引物和探针的反应才检测到荧光信号；重复性好，组内与组间的变异系数均小于2％。应用所 建立的检测方法，对猪源EMCVGXLC株感染小鼠的脑、心脏中IL-6、iNOSmRNA的表达水平进行了检测。结果表明，本研 究建立的TaqManreal-timePCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可以用于小鼠IL-6、iNOS基因的检测及定量 分析。 小鼠；IL-6；iNOS;荧光定量PCR；脑心肌炎病毒 Q78 A 1671-7236(2011)09-0044-08 2011-01-30 作者简介：施开创(1968-)，男，广西人，副研究员，博士，主要从 事动物疫病诊断与防控技术研究。 基金项 目：广西科学基金项目(桂科青0728047)；广西科技创新 能力与条件建设基金项目(08-05-01D)。 ·45· 性 第 下同。 缓解 @@1.陈进喜，施开创，黄胜斌，等.猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及 其3D基因分子特征的分析[J].中国畜牧兽医，2011，38(1): 81～87. @@2.施开创，屈素洁，陈进喜，等.猪源脑心肌炎病毒GXLC株全基因 组序列测定与分析[J].病毒学报，2010，26(2):134～142. @@3.盖新娜，杨汉春，郭鑫，等.猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定[J].畜 牧兽医学报，2007，38(1):59～65. @@4. BradyAJ,Poole-WilsonPA,HardingSE,etal.Nitricoxide productionwithincardiacmyocytesreducestheircontractilityin endotoxemia[J].AmJPhysiol,1992,263(6):H1963～ H1966. @@5. CerutisDR,BrunerRH,ThomasDC,etal.Tropismandhisto pathologyoftheD,B,KandMMvariantsofencephalomyocardi tisvirus[J].JMedVirol,1989,29(1):63～69. @@6. EvansHG,LewisMJ,ShahAM.Interleukin-1betamodulates myocardialcontractionviadexamethasonesensitiveproductionof nitricoxide[J].CardiovascRes,1993,27(8):1486～ 1490. @@7. FinkelMS,OddisCV,JacobTD,etal.Negativeinotropic sisofencephalomyocarditisvirus-induceddiabetesinmice[J].J effectsofcytokinesontheheartmediatedbynitricoxide[J].Sci Virol,2009,83(16):8004～8011. ence,1992,257(5068):387～ 389. @@17.MauriceH,NielenM,VytP,etal.Factorsrelatedtotheinci @@