ERK12信号传导通路介导的bFGF在人晶状体上皮细胞增殖分化中的作用及机制.pdfVIP

目 录 1 ERK1/2 信号传导通路介导的 bFGF 在人晶状体上皮细胞增殖分 化中的作用和机制 ……………………………………… 1 1.1 中文摘要……………………………………………………1 1.2 英文摘要……………………………………………………4 1.3 前言…………………………………………………………7 1.4 材料与方法…………………………………………………12 1.5 结果…………………………………………………………25 1.6 讨论…………………………………………………………34 1.7 结论…………………………………………………………44 1.8 参考文献……………………………………………………45 1.9 英汉缩略词对照表…………………………………………53 2 致谢…………………………………………………………55 3 硅油填充与并发性白内障（综述）………………………56 2 ERK1/2 信号传导通路介导的bFGF 在人晶状体上皮细胞增殖 分化中的作用和机制 中文摘要 目的：本实验将培养人晶状体上皮细胞进行分组，设定在相同剂量 的一定时间内用bFGF及ERK信号通路阻断剂PD98059刺激后，检测各 组间的细胞数量、α-平滑肌肌动蛋白mRNA及磷酸化ERK 的表达有无 差异及各组之间的趋势，探讨PCO 的形成是否在bFGF 的介导下通过 ERK途径参与及相关机制。 方法：采用体外原代培养人晶状体上皮细胞进行复苏、传代及培 养。待培养细胞传代3-5次，倒置相差显微镜观察细胞生长良好，覆盖 培养瓶达70-80%，即达到实验要求。加入10ug/L bFGF及特异性阻断 剂PD98059作用一定时间并根据作用时间进行分组。MTT法检测HLECs 数量及活性；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定HLECs中α-SMA mRNA 的表达；免疫印迹实验(Western blot)检测ERK蛋白磷酸化水平。所 有实验数据均在SPSS19.0系统软件上进行统计。 结果： 1. HLECs的数量在仅加了bFGF组中均增多，细胞活性增强，二组间差 异无统计学意义(P0．05)，作用时间较长组，细胞数量多于作用 短组，差异有统计学意义(P0．05)；只加bFGF组细胞数量明显多 于只加阻断剂组及空白对照组，差异有统计学意义(P0．05)；只 3 加入PD98059组无论在细胞数量及细胞活性,均低于其他组, 差异 有统计学意义(P0．05)；在均加入bFGF及PD98059组中，可见阻断 剂作用时间长组细胞数量及活性低于作用短的组别，差异有统计学 意义(P0．05)。 2. bFGF 作用剂量不变的情况下，随着作用时间的延长，可见α-SMA mRNA 表达增加明显，二组间差别有统计学意义(P0 ．05) ；在bFGF 作用时间6 小时后，可见α-SMA mRNA 值达最高，二组间差异有统 计学意义(P0 ．05) ；加阻断剂PD98059 作用后，α-SMA mRNA 表 达减少且随阻断剂作用时间的延长表达减少，二组间差异无统计学意 义(P0 ．05) 。 3 ．在bFGF剂量相同的情况下,随着作用时间的延长，p-erk的表达量逐 渐增多，证明了bFGF的分泌促进ERK信号通路的磷酸化。在空白对照 组非磷酸化的表达多于磷酸化，作用0.5h以后，磷酸化表达开始多于 非磷酸化，1小时左右磷酸化表达到达一个高峰，到6小时可见磷酸化 与非磷酸化的表达相差不明显。 结论： 1. bFGF 对HLECs 具有促增殖作用，在低浓度剂量不变的前提下，呈 现时间相关性。 2. bFGF 可促进HLECs 分泌α-SMA，促进HLECs 分化，并呈现时间 及剂量相关性。 3 ．bFGF 可能通过促进磷酸化的表达激活 ERK 1/2 信号通路，促进 HLECs 的增殖和分化。