ERK抑制剂对间歇低氧早期大鼠神经元凋亡和凋亡相 关蛋白表达的影响.pdfVIP

万方数据 Effects of ERK Inhibitor on Neuronal Apoptosis and The Expression of Apoptosis-related Protein in The Rats of Early Intermittent Hypoxia Dissertation Submitted to North China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirement for the degree of Master of Clinical Medicine by Wang Ling (Internal Medicine) Supervisor: Professor Wang Hongyang June, 2015 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 摘 要 摘 要 目的 通过构建大鼠间歇性低氧模型，观察早期间歇低氧后大鼠海马区神经元的凋 亡及凋亡相关蛋白的表达，注入ERK 抑制剂（U0126 ）将ERK 信号通路阻断，探 讨ERK 信号通路对早期间歇低氧大鼠海马CA1 区神经元凋亡及凋亡相关蛋白表达 的影响。 方法 选取Wistar 成年雄性大鼠135只，采用随机数字法随机分为正常对照组(UC 组) 、间歇低氧组(IH组) 、ERK抑制剂组（U0126 组），每组又分为1d、3d 、7d 、 10d、14d五个时间亚组，每个亚组选取9只大鼠。ERK抑制剂组于每日晨起7 ：00尾 静脉注入U0126 （0.2mg/kg ），注射30min后与IH组大鼠一起放入低氧箱内，使低氧 箱内交替循环不同流速的压缩空气及氮气，其中每个循环时间为120s，氧浓度波动 在5%至21%之间，每日暴露时间为7h ；UC组大鼠置于低氧箱内，持续给予21%氧浓 度的空气。每天各组大鼠实验结束后，置于饲养条件及生活环境相同的普通饲养 箱，给予充足的饲料及水源。在设计好的时间点处死大鼠，采用免疫组织化学法检 测各组大鼠海马CA1区ERK1/2、P53、Bax、Bcl-2的表达；蛋白免疫印迹法 （Western blot）检测海马CA1区ERK1/2、P53的表达；应用原位末端标记法检测大鼠海马CA1 区神经细胞的凋亡。免疫组化结果采用Motic医学图像分析系统进行半定量分析，分 析所得结果用积分光密度(IOD)值表示；采用Image J软件分析系统分析Western Blot 条带的吸光度A值，选择GAPDH作为内参，每个样本取3次重复实验的结果，每个样本 的A值与其内参A值相比所得值为最后结果；Tunel实验结果在显微镜40×10相同倍数 下观察，每张切片随机选择不同的视野5个，分别算出大鼠海马CA1区神经细胞的总 细胞数目及凋亡的细胞数目，凋亡细胞数目／总细胞数目×100 ％即为细胞凋亡指数 (AI) 。采用SPSS17.0统计学软件对实验结果进行统计学分析，分析实验所得数据用 均数±标准差（x¯±s ）表示，多组间的相互比较采用的方法是单因素方差分析（One- way ANOVA ），其中以P ＜0.05为差异具有统计学意义。 结果 1 大鼠海马CA1区神经细胞细胞凋亡的情况：光镜下凋亡的神经细胞形状呈 椭圆形或圆形，细胞