Erp57在先天性脊柱裂及肛门直肠畸形胎鼠脊髓中表达的研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………”1 英文论著摘要……………………………………………………………………·3 二、英文缩略语…………………………………………………………………………·8 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………·99日U吾…………………………………………………………………………………………………………‘ 材料和方法………………………………………………………………………11 结果………………………………………………………………………………………………………”14 讨论………………………………………………………………………………………………………”18 结论………………………………………………………………………………………………………”2l 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………23 五、参考文献…………………………………………………………………………24 六、附录 综j苤………………………………………………………………………………………………………一28 致谢………………………………………………………………………………………………·52 个人简介…………………………………………………………………………53 ·中文论著摘要· Erp57在先天性脊柱裂和肛门直肠畸形胎 鼠脊髓中表达的研究 目 的 先天性脊柱裂、先天性肛门直肠畸形均为常见的小儿先天性畸形，发病率分 别为19oo．5％0、0．2％0．0．7％o，中国发病率明显高于西方国家。先天性脊柱裂和先天 性肛门直肠畸形均为多基因遗传病，是遗传因素和环境因素共同作用的结果。但 是，这些畸形的具体发病机制尚不清楚，病理改变复杂，而且没有良好的预防和 治疗措施。因此，研究这些畸形的胚胎发生规律，可以为畸形的早期治疗和预防 提供必要的前期基础。 关于这些先天畸形的发生机制的研究一直是国内外倍受关注的热点课题。经 过一系列研究证实先天性肛门直肠畸形大多数存在明显的腰骶部脊髓神经发育异 常。利用药物致畸制作动物模型过程中我们也发现维甲酸和乙烯硫脲均可同时产 生先天性脊柱裂、先天性肛门直肠畸形这两种畸形。目前发现的畸形相关基因中 Hox、SHH和Gli3基因是先天性脊柱裂和先天性肛门直肠畸形的共同相关基因。 许多研究已经证实口服叶酸可以预防神经管畸形的发生，同时也能减少肛门直肠 畸形和四肢畸形的发生。因此，我们提出一个新的假设：先天性脊柱裂、先天性 肛门直肠畸形可能存在共同的发生机制，它们的发生可能都是与胚胎期脊髓神经 发育异常有关。 蛋白质组学是指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴学科，目的是 从整体水平分析细胞内动态变化的蛋白质结构、表达水平与翻译后修饰、细胞内 定位，了解蛋白质之间的相互作用与联系，对蛋白质所执行的生理性、病理性生 命活动做出最精细、最准确、最本质的阐述。蛋白质本身的存在形式、活动规律 仍依赖于直接对蛋白质的研究来解决。因此，直接研究蛋白质的变化具有不可替 代的意义。而且，随着蛋白质组学的研究进展，表达蛋白质组学是现今应用最为 广泛的蛋白质组学研究模式，即利用双向电泳建立蛋白质图谱并对分离的蛋白质 进行鉴定和分析。 由于患儿脊髓标本难以获取，因此建立先天性肛门直肠畸形及脊柱裂动物模 型对其发病机制进行深入研究非常必要。我们在全反式维甲酸(ATRA)诱导大鼠 模型的基础上，采用双向电泳技术对脊髓组织蛋白质进行分离，通过软件分析和 质谱．生物信息学方法寻找疾病相关蛋白质，在蛋白质水平探讨两种畸形之间的共 和治疗提供基础资料。 方法 一、建立脊柱裂、nTf]直肠畸形大鼠胚胎模型 1．将孕10d大鼠随机分为对照组和实验组，按135mg／Kg体重用灌胃法给予 实验组大鼠，对照组给予相应体积橄榄油。 2．孕17d剖腹取出胚胎，取出脊髓组织(范围：第12胸椎下缘至脊髓末端)。 二、模型胎鼠与对照胎鼠脊髓组织蛋白质组差异分析 1．提取胎鼠脊髓组织的总蛋白质，Bradford法进行蛋白定量。 2．等电聚焦使用Ettan