GnRHa对裸鼠卵巢癌移植瘤模型的化疗效果影响和卵巢功能保护的实验研究.pdfVIP

广州医学院硕士论文 GnRHa 对裸鼠卵巢癌移植瘤模型的化疗效果影响及卵巢功能保护的实验研究 GnRHa 对裸鼠卵巢癌移植瘤模型的化疗效果影响及 卵巢功能保护的实验研究 硕士研究生：林琼燕 导 师：王沂峰 教授 专 业：妇产科学 中文摘要 背景 卵巢癌目前仍是妇科恶性肿瘤中妇女首要的死亡原因。目前卵巢癌的发病日 趋年轻化，且多数确诊时已到晚期。传统手术治疗、放、化疗及生物治疗等治疗 措施疗效有限，不良反应大，5 年生存率徘徊在 30%左右。顺铂为目前治疗卵巢 肿瘤的一线化疗药物。但顺铂不仅对肿瘤细胞有杀灭作用，同时也对正常的卵巢 组织，特别是卵母细胞造成伤害，导致卵巢功能下降甚至早衰（premature ovarian failure ）。文献报道 80%卵巢癌细胞表达 GnRH 受体，体外实验证实，GnRH 类 似物通过与 GnRH 受体结合发挥直接抑制肿瘤生长和抗增殖作用、诱导凋亡作 用。有实验研究促性腺激素释放激素激动剂（gonadotropin-releasing hormone agonist GnRHa）可能抑制下丘脑-垂体-性腺轴，阻止原始卵泡的募集及进一步 发育成熟，在肿瘤化疗过程中有卵巢功能保护的作用。目前甚少有研究关于卵巢 肿瘤化疗过程中应用 GnRHa 对化疗效果的影响。故通过动物体内试验研究顺铂 化疗过程中应用 GnRHa 对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响及是否有卵巢功能保护作 用，以寻求既提高卵巢癌患者的生存质量又不影响肿瘤化疗效果的治疗方法，具 有重要的临床指导意义。 目的 通过建立裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤动物模型，并应用顺铂化疗及联合应用 GnRHa（曲普瑞林），探讨GnRHa对顺铂化疗效果的影响及对卵巢功能保护作用 。 2 广州医学院硕士论文 GnRHa 对裸鼠卵巢癌移植瘤模型的化疗效果影响及卵巢功能保护的实验研究 （一）构建动物模型及探讨 GnRHa 的卵巢功能保护作用 方法 1．人卵巢癌细胞株OVCAR-3在高糖型DMEM培养基中培养至对数生长期，0.25％胰 蛋白酶消化3min，终止反应，制备成单细胞悬液，细胞计数，调整细胞密度为2 7 ／ml。 ×10 2．4只裸鼠进行成瘤预实验。在SPF环境超净工作台内，以75%酒精消毒腹部皮肤， 腹腔接种0.2ml细胞悬液，观察两组动物成瘤情况。 3．观察1月后取肿瘤组织进行HE染色病理学检查及腹腔肿瘤原代培养，确定病理 结果为低分化卵巢浆液性囊腺癌及原代细胞培养与OVCAR-3一致。再取24只裸鼠 随机分为4组按预实验方法进行动物接种，成瘤后遂将24只裸鼠随机分为4组：即 对照组[腹腔注射生理盐水（NS）0.2ml/w×6w]、顺铂组(第一天腹腔注射NS0.2 ml，2周后腹腔注射顺铂5mg/w×4w)、GnRHa+NS组(GnRHa0.3mg皮下注射，2周后N S0.2ml/w腹腔注射×4w)、联合用药组(GnRHa0.3mg皮下注射，2周后顺铂腹腔注 射5mg/w×4w)；每组6只。每周称裸鼠体重。 4．卵巢组织形态学观察及计数具有正常结构的原始卵泡及生长卵泡数。 5．小鼠血清抗苗勒管激素（AMH）ELISA检测。 结果 裸鼠腹腔接种后第 10 天可观察到腹部稍膨隆，活动减少，腹腔进针处可见 米粒样大小结节，各组体重增长曲线见附图；打开腹腔，可见肿瘤结节分布于肠 管、腹膜表面、肠系膜为主，直径约3-15mm（见附图）。仅有对照组中1只裸鼠 尸解时发现有淡黄色腹水约 0.4ml。总成瘤率为 96%。腹腔肿瘤原代培养细胞形 态与OVCAR-3细胞形态一致。病理学检查结果：为低分化卵巢浆液性囊腺癌。肿 瘤组织呈团块状，侵犯脂肪组织及横纹肌组织；细胞核核浆比例增大，细胞浆透 明空泡状，部分红染；细胞核呈卵圆或不规则形，见有核仁，并可见散在凋亡细 胞（图2、3）。 用药后对照组裸鼠卵巢形态正常，顺铂腹腔注射给药后卵巢组织肉眼