RhoRho激酶抑制剂对大鼠肺动脉高压肺血管重构的影响和其机制研究.pdfVIP

目 录 1 Rho/Rho 激酶抑制剂对大鼠肺动脉高压肺血管重构的影 响及其机制研究…………………………………………1 1.1 中文摘要…………………………………………………1 1.2 Abstract ……………………………………………………4 1.3 前言…………………………………………………………8 1.4 材料和方法………………………………………………13 1.5 实验结果…………………………………………………33 1.6 讨论………………………………………………………40 1.7 结论………………………………………………………49 1.8 附图表……………………………………………………50 1.9 参考文献…………………………………………………55 1.10 英文缩写及符号说明……………………………………65 2 致谢………………………………………………………67 3 综述………………………………………………………68 Rho/Rho 激酶抑制剂对大鼠肺动脉高压 肺血管重构的影响及其机制研究 摘 要 目的：采用左肺切除+野百合碱（MCT ）项背部皮下注射建立大 鼠肺动脉高压动物模型，探讨大鼠肺动脉高压肺血管和心室重构的特 点，以及Rho/Rho激酶在转录水平的变化及其活性对肺高压肺血管重 构的影响；探讨Rho/Rho激酶抑制剂法舒地尔不同给药方案对大鼠肺 动脉高压肺血管重构的作用及其机制，为法舒地尔(fasudil) 的临床应 用提供实验依据。方法：1、将60只健康雄性SD大鼠（300-350g ）随 机分为5组（每组12只），即C组：空白对照组，不给与任何处理；J 组：假手术组，手术暴露左侧胸腔同左肺切除手术相同时间；M组： 模型组，左肺切除+野百合碱(MCT，60mg/kg) 项背部皮下注射；F1 组：左肺切除+MCT注射，于术后21d给与fasudil (2mg/kg.d )尾静脉注 射, 每日一次；F2 组：左肺切除+MCT注射，于术后7d给与fasudil (2mg/kg.d )尾静脉注射, 每日一次。2 、术后35d，大鼠腹腔注射10% 水合氯醛（0.04ml/kg ）进行麻醉，经右侧颈外静脉插管，测定各组大 鼠平均肺动脉压力（mPAP ）。3、脱颈法处死动物后取下心脏，完整 分离右心室游离壁（RV ）和左心室+室间隔（LV+S ），计算RV/(LV+S) 比值了解心室重构情况。4 、各组大鼠肺组织行HE染色、SM- α-actin 免疫组化染色和Elastin-Van Gieson染色，观察肺血管和肺组织的病理 学改变，并计算非肌性血管肌化程度、肺小动脉新生内膜增殖度、平 1 均血管阻塞计分、肺小动脉中膜厚度百分比等体视学指标。5、应用 RT-PCR检测各组大鼠肺组织ROCK1和ROCK2 mRNA相对表达水平 的变化。6、采用Western blot检测各组大鼠肺组织p-MYPT表达量变化， 以了解Rho激酶活性的变化对肺血管重构的影响。结果：1、M组大鼠 在实验过程中均出现不同程度的体重不增甚至下降、松毛、活动减少、 呼吸急促等。M组有5只死亡，F1组有1只死亡，其余组无死亡，上诉 情况表现轻微。2 、与C组和J组大鼠比较，M组大鼠的mPAP显著升高 [(58.56 ±3.56 vs. 22.36 ±1.75 and 23.31±1.51) mmHg], 差异均有统 计学意义（P＜0.001 ）；给与法舒地尔干预后，与M组大鼠比较，F1 组和F2组大鼠mPAP均较M组有不同程度下降[(39.99±4.10 and 34.76 ±7.36 vs. 58.56 ±3.56) mmHg], 差异均有统计学意义 (P＜0.01)，且 F2组下降更加明显，差异有统计学意义 (P＜0.