SUMO化修饰对高糖刺激的肾系膜细胞TGF-βSmad信号通路的调控探究.pdfVIP

目 录 1 SUMO 化修饰对高糖刺激的肾系膜细胞TGF-β/Smad 信号 通路的调控研究………………………………………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………3 1.3 前言……………………………………………………………6 1.4 材料与方法……………………………………………………8 1.5 结果……………………………………………………………25 1.6 讨论……………………………………………………………36 1.7 结论……………………………………………………………42 1.8 参考文献………………………………………………………43 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………48 2 致谢……………………………………………………………49 3 SUMO 化修饰对TGF-β 信号通路的调控作用 （综述） …………………………………………………………………50 2 SUMO 化修饰对高糖刺激的肾系膜细胞TGF- β/Smad 信号通路的调控研究 摘 要 目的：糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病特有而严重的微 血管并发症，晚期以肾小球硬化和肾小管肾间质纤维化为主要病理改变。 转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)是致纤维化的关键信 号分子，而 TGF-β/Smad 通路是介导糖尿病肾病后期纤维化的重要信号通 路。目前已公认TGF-β 信号通路受到磷酸化、泛素化等翻译后修饰调节， 近年研究显示该通路还受到小泛素相关修饰物（small ubiquitin related modifier, SUMO）化调节。SUMO 及其特异性酶可通过修饰TGF-β 通路中 某些重要信号分子如：TGF-β I 型受体（ type I TGF-β receptor，TβR Ⅰ)、 Smad4 等对该通路进行调控。既然SUMO 化修饰对TGF-β 信号通路有重 要的调控作用，而TGF-β 通路又是糖尿病肾病致纤维化的关键通路，那么 SUMO 化修饰是否参与了糖尿病肾病TGF-β 信号通路的调控值得研究。为 此，本研究观察高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞中SUMO 与Smad4 蛋白的 表达及二者之间的相互作用，探讨 SUMO 化修饰在糖尿病肾病 TGF- β信号 通路中的作用与机制。方法：高糖作为刺激因子，将体外培养大鼠肾小球 系膜细胞（Glomerular Mesangial Cells ，GMCs ）分为5 个组：正常对照组 (NC 组，培养基含5.6mmol/L 葡萄糖) ； 10 mmol/L 高糖组（HG1 组，培养 基含10 mmol/L 葡萄糖）；20 mmol/L 高糖组（HG2 组，培养基含20 mmol/L 葡萄糖）；30 mmol/L 高糖组（HG3 组，培养基含30 mmol/L 葡萄糖）；渗 透压对照组（OP 组，培养基含5.6 mmol/L 葡萄糖 + 24.4 mmol/L 甘露醇）， 3 将各组细胞分别培养6h、12 h、24 h 后用于实验。用Western-blot 检测各 组细胞SUMO(SUMO1、SUMO2/3 、SUMO4)和Smad4 蛋白表达，RT-PCR 检测SUMO 和纤维连接蛋白（fibronectin，FN ）mRNA 表达；免疫共沉淀 和免疫荧光双染技术分别检测肾小球系膜细胞中SUMO 与 Smad4 蛋白间 的相互作用及共定位关系。结果：1、与正常组比较，各高糖组SUMO1、 SUMO2/3 和Smad4 蛋白表达均增强（P0.05 ），呈一定浓度依赖性；与正 常组比较，高糖作用6h 后SUMO1、SUMO2/3 和Smad4 蛋白表达无明显 变化，作用 12h、24h 后表达逐渐增加（P0.05 ）；SUMO1 和Smad4 表达 在渗透压组与正常组间差异无统计学意义（P 0.05 ），SUMO2/3 渗透压组 较正