冬凌草甲素联合柔红霉素对jurkat细胞的增殖抑制作用和其机制的研究.pdfVIP

冬凌草甲素联合柔红霉素对jurkat细胞的增殖 抑制作用及其机制的研究 研究生：张晓芬 专业：内科学 导师：周丽教授 中文摘要 目的 冬凌草甲素(OridoIlill)是一种从冬凌草植物(Rabdosanlbescens)中提取出来的具 有生物学活性的四环二帖类化合物，研究发现它具有抗炎、抗菌和抗肿瘤的功效，冬 凌草甲素对多种肿瘤细胞有不同程度的抑制作用，但对急性T淋巴细胞白血病的研究 鲜有报道本实验采用_急性T淋巴纽胞白血病讯】11囝f细胞作为体外实验研究的对象， 促凋亡作用并对冬凌草甲素诱导iurkat细胞凋亡机制的研究进行初步的探讨，为临床 治疗急性T淋巴细胞白血病的新药开发利用提供一定的实验依据。 方法 冬凌草甲素单用及联合化疗药物柔红霉素作用于jurkat细胞48h后凋亡的影响；为进 一步明确冬凌草甲素诱导jⅢkat细胞凋亡的部分作用机制，在第二部分实验中采用流 式细胞仪检测冬凌草甲素作用于j破at细胞48h后的周期分布变化；罗丹明123检测冬 于jurkat细胞48h后的caSpase一3酶活性变化。 结果 1、CCK-8检测jurkat细胞的增值抑制作用 CCK．8试剂盒检测表明相同时间下，随着药物浓度的增加，吸光度值逐渐降低； 相同药物浓度下，随着作用时间的延长，吸光度值逐渐减低，表明冬凌草甲素对jurkat 细胞的作用呈现一定的剂量．时间依赖性。取对jurkat细胞抑制作用最弱的1u咖l柔 1 红霉素联合不同浓度的冬凌草甲素共同作用于jurkat细胞，其抑制作用高于单用柔红 霉素及冬凌草甲素，且差异具有统计学意义(P0．05)，金氏公式判断冬凌草甲素联 合柔红霉素对j咄at细胞具有协同抑制效应。 2、细胞形态学观察 相差显微镜下，随着药物浓度的增加，细胞密度逐渐减低，边缘不清，亮度逐渐 减弱，呈现膜皱缩、核破裂等溶解性坏死等变化；Giemsa染色观察空白对照组细胞 边缘光滑，染色质紫红色，伴随药物浓度的增加，胞膜皱缩，细胞核边集，空泡变性、 染色质密集浓染，部分观察到凋亡小体等凋亡形态学变化；罗丹明123染色观察随着 药物浓度的增加，jurkat细胞呈现胞体萎缩，细胞荧光染色强度减弱等表现。 3、AnnexinV．FITC／PI双染法检测药物对jurkat细胞的凋亡率 流式细胞仪检测结果显示：不同浓度的冬凌草甲素(1肛咖l、2肛g／m1、4删、 有统计学意义，柔红霉素最低诱导凋亡浓度(0．04“g／m1)联合接近IC50浓度的冬凌草 甲素(4肛鲋m)共同作用于j删kat细胞48h，其凋亡率明显高于单用柔红霉素、冬凌草 甲素的凋亡率，差异具有统计学意义。 4、冬凌草甲素对细胞周期分布变化的影响 流式细胞仪检测表明：不同浓度的冬凌草甲素(1删、2¨咖1l、4“咖l、8p咖l、 其中8p咖l、16删冬凌草甲素处理组与空白对照组相比，差异具有统计学意义(P 0．05)；S期细胞呈减少趋势，各浓度处理组与空白对照组相比，差异均具有统计 学意义(P0．05)。实验表明冬凌草甲素影响细胞周期分布，可诱导j咄at细胞阻滞于 G1期。 5、罗丹明123检测冬凌草甲素对jurl‘at细胞膜电位的影响 FCM检测表明：随着药物浓度的增加，荧光强度呈浓度依赖性降低，各浓度处 是冬凌草甲素诱导j破at细胞凋亡的机制之一1。 2 统计学意义。实验表明随着药物浓度增加吸光度值呈现浓度依赖性增加，间接反映 caSpaSe．3酶活性逐渐增高。 结论 1、冬凌草甲素对iurkat细胞具有增殖抑制作用，该作用具有一定的时间一剂量依 赖性；当冬凌草甲素联合化疗药物柔红霉素时对iurkat细胞具有协同抑制作用，提示 冬凌草甲素本身可作为一种新型抗肿瘤药物在抑制白血病细胞生长、诱导其凋亡的同 时，还可以作为化疗药物的辅助用药，增强化疗药物对白血病细胞的敏感性、降低用 药量及其副作用。 2、冬凌草甲素对iud(at细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现的，其机 制主要如下： 影响细胞周期分布，将细胞阻滞于Gl期，周期阻