乳斑微转移模型在胃癌干细胞和前驱细胞研究中的作用和临床意义.pdfVIP

乳斑微转移模型在胃癌千细胞及前驱细胞 研究中的作用及临床意义 博士生姓名：曹 亮 指导教师：胡 祥教授 指导小组：徐迎新 教授 专业名称：外科学。 摘 要 胃癌(Gastric cancer)是我国常见的恶性肿瘤之一，发病率在消化道 肿瘤中居首位。目前临床上诊治的胃癌多以进展期为主，即使进行了根 治性的外科手术治疗，术后的复发转移率仍然很高，尤其是胃癌术后的 腹膜转移。辅助性化学治疗使胃癌患者的5年生存率和生存质量有了一 定的改善，但是目前的化疗药物主要针对的是处于分裂期的肿瘤细胞， 而处于休眠状态的肿瘤细胞却无法消除，而这些细胞正是肿瘤术后复发、 转移的关键。 20世纪70年代人们开始注意到肿瘤细胞在增殖和分化等方面与干 细胞具有很多相似的地方，并提出了肿瘤是一种干纽胞疾病的理论，这 一理论改变了人们对肿瘤的认识，为肿瘤的研究开辟了新的探索方向。 stem 肿瘤干细胞(Cancercell，CSC)学说认为：肿瘤是由正常的干细 胞或比较原始的细胞转变而来，相似的信号通道调节着干细胞及肿瘤细 胞的自我更新。肿瘤细胞中存在着一小群具有极强自我更新能力的肿瘤 干细胞，它们在驱动着肿瘤的形成，并在肿瘤的转移方面起着重要的作 用。近十几年来，人们相继从脑胶质瘤、乳腺癌、肝癌、头颈部癌、结 肠癌、胰腺癌等实体肿瘤中分离并鉴定出了肿瘤干细胞，并对其生物学 特性、信号通道的调控、基因特征进行了研究，极大地完善了肿瘤干细 胞学说。由此，肿瘤干细胞理论逐渐被大家所接受并认同。肿瘤干细胞 理论进一步认为：只有杀灭肿瘤干细胞才能彻底根治恶性肿瘤。这一学 说的提出为肿瘤的学研究开拓了新的方向，也对传统的肿瘤病因学说提 出了新的挑战。 此项实验主要建立在肿瘤干细胞理论的基础上，通过建立胃癌大网 膜乳斑微转移模型，利用胃癌大网膜乳斑的独特微环境特点，探讨乳斑 微转移模型在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的意义；分析乳斑内具有干 细胞特性的“成团型微转移内肿瘤细胞的细胞生物学特性和干细胞表 面标志物的表达特点，分析特异性相关表面标志物在胃癌组织中的表达 与胃癌患者预后的相关性；进一步探讨胃癌干细胞的淋巴结微转移形式， 比较分析胃癌细胞乳斑微转移与淋巴结微转移的共同点，进一步探讨胃 癌干细胞转移的早期表现转移形式及其对早期胃癌预后的影响。 第一部分：大网膜乳斑在胃癌腹膜转移中的作用 目的：观察大网膜乳斑在胃癌腹膜转移过程中的作用，胃癌乳斑微 转移病灶形成的特点，发生微转移的时间、特点和动态过程。 材料方法：扫描电镜、透射电镜、HE染色观察乳斑的基本结构、组 成。制作胃癌腹膜转移模型，体外Dil荧光染料标记6l5小鼠胃癌来源 MFC细胞，荧光显微镜下观察计算细胞荧光标记率100％，台盼兰拒染 21d(每个时间点取小鼠6只，雌雄各半)脱颈处死，避光处完整取大网 膜置入福尔马林固定，免疫组化观察胃癌细胞在乳斑区和非乳斑区的不 同和变化过程。 结果：扫描电子显微镜观察发现乳斑区表面可见不连续的间皮细胞、 巨噬细胞和淋巴细胞，乳斑表面散在分布大小不等的孔和间隙，透射电 子显微镜观察发现乳斑区主要是由巨噬细胞构成，同时含有少量的淋巴 细胞，中性粒细胞，基质细胞和少量的未成熟细胞。将一定数量的 Dil．MFCs注入小鼠腹腔发现l2小时后，Dil．MFCs开始大量出现在乳斑 区域：腹腔注射48h，在巨噬细胞杀伤作用下，大部分胃癌细胞消除，仅 有少量细胞存活，散在分布在乳斑的周围；72h后，Dil．MFCs细胞进一步 clusters 减少，但可见增殖肿瘤细胞团，形成“成团型(Cell type)微转 移；腹腔注射7天，乳斑区散在细胞消失，仅存在增殖肿瘤细胞团，形成 显性转移。肿瘤细胞在腹腔注射72h后散在少量的出现在非乳斑区，7 数量一过性减少情况，10天后，Dil．MFCs细胞量增加，但是仅形成单细 胞转移，未发现细胞团。胃癌细胞腹腔注射14天后，乳斑区形成以乳斑 为中心的团状转移灶，细