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人β防御素—4在牙龈组织表达新发现[摘要] 目的 探讨牙龈组织中是否存在β防御素-4（hBD-4）及其分布情况。方法 收集健康牙龈标本。采用免 疫组织化学法检测18例牙龈组织标本hBD-4蛋白水平的分布；提取组织RNA，进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real time RT-PCR）检测30例牙龈标本中hBD-4基因的表达水平。结果 免疫组织化学检测结果显示，18例牙龈样本中有13例检出hBD-4；real time RT-PCR检测结果显示，30例牙龈组织中4例样本检测出hBD-4表达。结论 hBD-4在健康牙龈组织中有不同水平的表达和分布，可能在维持牙周组织健康中起作用。 [关键词] 牙龈； 人β防御素-4； 免疫组织化学； 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 [中图分类号] Q 26 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.02.013 防御素是一族富含半胱氨酸残基的阳离子短肽，根据6个半胱氨酸残基的位置和连接差异，人防御素可以分为α防御素和β防御素（human β defensin， hBD）[1]。其中，hBD由哺乳动物单核细胞/巨噬细胞、上皮细胞等产生，主要分布在脊椎动物的皮肤、黏膜等上皮组织，在机体宿主-环境的界面位置，构成机体非特异性天然免疫系统中抵御外界伤害刺激的第一道生化屏障。hBD通过直接杀灭和/或使细菌、真菌及病毒等病原因子某部分失活，阻止病原菌入侵[2]；还可能调节获得性免疫的重要信号分子，对 单核细胞、T细胞等具有选择性趋化作用[3]，从而加速免疫和伤口愈合过程，对炎症起调节作用。 迄今发现4种人hBD，分别为hBD-1、hBD-2、hBD-3、hBD-4，可在呼吸道上皮、牙龈上皮、泌尿生殖器上皮、鼻黏膜、眼内组织、毛细血管内皮细胞、肠上皮、前列腺上皮[4-5]等组织中被检出。已有大量学者报道了hBD-1、hBD-2、hBD-3在牙龈上皮内的表达情况。Vardar-Sengul等[6]检测牙龈组织 中hBD-1的mRNA表达水平，结果发现，hBD-1在龈炎和侵袭性牙周炎组表达较低，在慢性牙周炎组的表达显著高于健康对照组。张旭等[7]采用免疫组化 的方法检测11例健康人、18例慢性牙周炎患者、9例侵袭性牙周炎患者牙龈组织中hBD-2的表达。结果显示，健康组hBD-2的表达水平显著高于慢性牙周炎组。但是，其他组间未见显著性差异。Lu等[8] 检测慢性牙周炎和健康人牙龈组织中hBD-3的表达，结果显示，88%的样本可检测到hBD-3。 hBD-4与其他防御素不同，该防御素在某些上皮中选择性表达，已有研究证实：在中性粒细胞、甲状腺、肺、子宫、肾上皮细胞中存在hBD-4[9]。hBD-4在下呼吸道感染的先天性免疫中起重要作用，能特异性抑制大肠杆菌和铜绿假单胞菌[10]，且能对（12-）十四酸佛波酯（-13-）乙酸盐（phorbol 12-myristate 13-acetate）作出特异性应答[3]。相比健康胃上皮细胞，hBD-4在幽门螺杆菌所致感染或非幽门螺杆菌所致感染胃炎中表达均上调[11]。Supp等[12]研究证实hBD-4能抑制细菌的耐药性。Musumeci等[13]用形态学、免 疫组织化学和蛋白质印迹法证实hBD-4在骨关节炎患者膝部半月板中高表达。这些研究表明hBD-4在人体多种组织中存在，并且与组织健康有关系。但是，hBD-4在口腔中的分布情况迄今国内外尚未见报道。 本研究采用免疫组织化学技术和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real time reverse transcription- polymerase chain reaction，real time RT-PCR）方法，从蛋白和基因两个水平检测健康牙龈组织中hBD-4的分布情况，为研究该防御素在牙周组织中的作用奠定基础。 1 材料和方法 1.1 主要试剂 兔二抗Envision免疫组化试剂盒（DAKO公司，德国），兔特异性hBD-4（Santa Cruz公司，美国），二 氨基联苯胺（DAB）（Thermo Scientific公司，德国）， QIAGEN RNeasy[R] MiniKit（QIAGEN公司，德国）， iCycler Thermal Cycler仪（Bio-Rad公司，德国）。 1.2 患者信息和标本收集 收集2012年3—5月就诊于四川大学华西口腔医院牙周科和颌面外科门诊行阻生牙拔除或冠延长患者的正常牙龈组织48例。标本收集通过四川大学口腔疾病研究国家重点实验室伦理委员会批准。纳入标准：牙龈探诊出血阴性，无附着丧失，无牙周袋（pocket depth，PD