经前平颗粒对愤怒情绪反应大鼠模型γ-氨基丁酸B2受体表达地影响与真核表达载体地构建.pdfVIP

目 录 引 言1 第一部分 经前平颗粒对愤怒情绪反应大鼠模型 GA BA BR2 表达的影响 3 实验一 经前平颗粒对愤怒情绪反应大鼠模型 GA BABR2 m RNA 表达的影响3 材料与方法3 1 材料 3 1.1 实验动物 3 1.2 药品及试剂 3 1.3 仪器及器材 3 2 方法 4 2.1 大鼠模型制备 4 2.2 给药方法 4 2.3 居住入侵实验操作 4 2.4 造模后行为学评价 4 2.5 大鼠脑组织总 RNA 的提取 5 2.6 RT-PCR 6 3 数据处理 8 结 果9 1 大鼠造模后行为学评价 9 1.1 混合攻击行为得分 9 1.2 糖水偏好结果 9 1.3 旷场实验结果 10 2 大鼠不同脑区 GA BABR2 m RNA 的表达结果 10 实验二 经前平颗粒对愤怒情绪反应大鼠模型 GA BABR2 蛋白表达的影响 11 材料与方法11 1 材料 11 1.1 实验动物 11 1.2 药品与试剂 11 1.3 实验仪器 12 1.4 试剂的配制 12 2 方法 16 2.1 大鼠模型制备 16 2.2 蛋白的提取和测定 16 2.3 蛋白免疫印记 （W estern bolt） 17 3 数据处理 21 结 果21 讨 论22 1 怒致病的相关机理 22 1.1 怒的概念内涵和分型 22 1.2 致怒条件 23 1.3 怒产生的机理 23 1.4 怒致病的机理 24 1.5 怒所致情志病证 24 2 调肝方药经前平颗粒对愤怒情绪的调节作用 24 3 愤怒情绪反应大鼠模型的造模及评价 25 3.1 动物模型制作 25 3.2 模型评价 26 3.3 模型结果分析 26 4 GA BABR2 与情绪调控 26 5 问题与展望 28 第二部分 GA BA BR2 基因克隆及真核表达载体的构建 29 材料与方法29 1 实验材料 29 1.1 药品与试剂 29 1.2 实验仪器 29 1.3 动物 29 1.4 试剂配制 29 2 方法 30 2.1 总 RNA 的提取 30 2.2 RT- PCR 31 2.3 目的片段回收 34 2.4 目的片段与克隆载体连接 34 2.5 制备感受态细胞 35 2.6 大肠杆菌细胞的转化 35 2.7 质粒 DNA 的提取 36 2.8 重组 T 载体双酶切 36 2.9 真核表达载体的构建 37 结 果37 1 GA BABR2 cDNA 的 RT-PCR 电泳结果 37 2 含目的基因的条带电泳结果 38 3 重组真核表达质粒酶切电泳结果 38 4 测序结果及比对 39 讨 论40 1 真核表达载体构建相关问题 40 1.1 基因表达载体概述 40 1.2 目的基因和载体结合 41 1.3 GA BA BR 2 真核表达载体构建 41 2 GA BA BR2 的结构和功能 42 3 GA BAB 受体的细胞信号传导通路 44 3.1 与 G 蛋白偶联影响离子通道 44 3.2 与 G 蛋白偶联影响腺苷酸环化酶 （A C ）系统 45 3.3 直接作用于转录因子 46 3.4 其他 46 4 问题与展望 46 结 语47 参考文献48 综 述54 附录：缩写词表68 致 谢70 论文著作71 引 言 随着当今社会发展，竞争加剧，心理压力增大，情绪对健康和疾病的影响，愈 来愈受到社会各界的关注，尤其是不 良情绪对健康与疾病的影响已逐渐成为国际医 学界关注的焦点，而怒是不良情绪中最令人难以忍受的负性情绪之一[1]。在表现形 式上怒有愤怒和郁怒两种形式，愤怒表现为发怒后向他人发泄，郁怒表现为发怒后 不发泄而郁于心中[2]，国外学者认为愤怒和郁怒分别对焦虑和抑郁及其相关症状产