双歧杆菌对实验性末端回肠炎地保护作用与肠上皮细胞TLR2、TLR4地影响.pdfVIP

双歧杆菌对实验性末端回肠炎的保护作用 及肠上皮细胞TLR2、TLR4 的影响 硕士研究生：胡咏 指导 老师：周国华 教授 专业 名称：内科学 中文摘要 目的：1.建立回肠-盲肠侧侧吻合术导致的的实验性末端回肠炎动物模型以及 双歧杆菌干预模型，为下一步研究做准备。2.观察发病过程中各组标本的炎症变 化，探讨双歧杆菌在发病过程中的作用。3.研究toll 样受体在双歧杆菌干预下的 表达。 方法: 清洁级SD 雄性大鼠100 只，随机分为A-E 五组：正常对照组 （A ）、 模型对照组（B ）、双岐杆菌低剂量干预组（C ）、中剂量干预组（D ）及高剂量干 预组（E ），每组20 只。分别给B-E 组大鼠行腹腔麻醉并回肠末端-盲肠侧侧吻合 术、A 组只作处理腹腔麻醉处理。造模开始的同时，C-E 组大鼠每日分别予以双 6 8 10 歧杆菌 10 cfu/ml、10 cfu/ml、10 cfu/ml 菌悬液各 1ml 灌胃处理，A 、B 两组予 以等量 10%脱脂乳灌胃 1ml 作为对照，期间观察术后动物的一般状态。手术后 第2 、8 周分批处死动物，取距吻合口 1-3cm 处末端回肠组织，行苏木素－伊红 （hematoxylin-eosin staining, HE ）染色观察这五组大鼠末端回肠的炎症情况，行 肉眼评分及镜下肠组织病理学评分（histopathological score,HS ）。使用免疫组化 法检测各组末端回肠粘膜中TLR2、TLR4 的表达。 结果： 1、实验动物的一般情况 术后3-5 天，模型对照组与双歧杆菌干预组动物 均出现一般状况差，体重下降，模型对照组术后 2 周左右恢复,而双歧杆菌治疗 组一般于术后 6-8 天便恢复，各时期的体重下降有统计学差异( P ＜0.05) 。各组 死亡率差异无显著性（P0.05 ）。 2 2 、末端回肠组织肉眼组织病理学评分：2 周时模型对照组与双歧杆菌治疗 组末端回肠组织肉眼观均出现急性炎症表现，但模型对照组炎症较双歧杆菌干预 组重，评分有统计学差异（P ＜0.05 ），双歧杆菌治疗组随着灌胃剂量的增大，炎 症程度逐渐减轻，三组评分有统计学差异（P ＜0.05 ）。第8 周时，模型对照组炎 症最为明显，而双歧杆菌治疗组2 周时炎症反应最为明显，8 周时双歧杆菌治疗 组随着灌胃剂量的增大，炎症程度逐渐减轻，三组评分有统计学差异（P ＜0.05 ）。 3、末端回肠组织光镜下组织病理学评分：在造模2 周后，B-E 组回肠末端 均出现急性炎症表现；与A 组相比，B 组的HS 显著增高 （P ＜0.01 ）; C、D 组 的HS 均低于B 组（P0.05) ；E 组的HS 明显低于B 组 （P0.01 ）。随着双歧杆 菌灌胃剂量的增加，C、D 、E 组炎症程度依次减轻，三组评分有统计学差异（P ＜0.05 ）。术后8 周时B 组为明显的慢性炎症反应表现，镜下见大量炎性细胞浸 及粘膜及粘膜下层，以淋巴细胞为主，粘膜部分出现脱落、糜烂或浅溃疡形成， 淋巴管、乳糜管扩张，粘膜下结构破坏，毛细血管增生。C、D 、E 干预组 2 周 时炎症最明显，8 周时炎症明显减轻。B 组与C、D 、E 组及A 组相比，差异有 显著性（P ＜0.05 ）。 4 、末端回肠组织TLR2 的表达:术后2 周时 模型对照组末端回肠组织TLR2 平均吸光度（A ）值显著高于正常对照组(P0.01);双歧杆菌干预组 TLR2 的平均 吸光度值低于B 组(P0.05) 。8 周时模型对照组TLR2 的 平均吸光度值高于正常 对照组（P ＜0.05 ）；双歧杆菌干预组 TLR2 的平均吸光度值均低于模型对照组 (P0.05) 。TLR2 的平均吸光度值与镜下组织病理学评分呈正相关（P0.05 ）。 5、末端回肠组织TLR4 的表达:术后2 周时 模型对照组末端回肠TLR4 平均 吸光度值明显高于正常对照组(P0.05);双歧杆菌干