四种中药单体对HepG2细胞枯草溶菌素转化酶9表达地影响.pdfVIP

四种中药单体对HepG2 细胞 枯草溶菌素转化酶9 表达的影响 中文摘要 动脉粥样硬化（atherosclerosis，As ）危险因素众多，其中高血脂是As形 成的主要危险因素之一，血浆胆固醇水平升高能够在缺乏其他危险因素的情况 下独立地诱发As ，其水平升高与As发病率呈正相关。因此降低血胆固醇水平 成为治疗As 的关键。 枯草溶菌素转化酶9 （proprotein convertase subtilisin/kexin 9 ，PCSK9 ）是 2003 年应用生物信息学方法和DNA 微阵列技术发现的一个与血液胆固醇代谢 调节相关的基因。研究发现PCSK9 的主要作用是降解肝脏低密度脂蛋白受体 （low density lipoprotein receptor ，LDLR ），从而影响血脂水平。以PCSK9 为 靶点的新药筛选是目前一个研究热点，有效的抗PCSK9 新药的发现被认为可 能是继他汀类药物之后降脂药物研究领域的又一重要革命。 齐墩果酸(oleanolic acid，OA)、熊果酸(ursolic acid，UA) 、槲皮素(quercetin ， Que)和金丝桃苷( hyperin，Hyp)是四种天然来源的化合物。OA和UA为五环三 萜类化合物，Que是一种多羟基黄酮类化合物，Hyp属于黄酮醇苷类化合物， 均广泛存在于自然界中。大量研究均表明OA、Que、UA和Hyp具有显著的降 血脂作用，能够调节脂质代谢，但它们的降血脂作用是否与PCSK9有关却未见 报道。 目的 观察OA、Que、UA和Hyp对HepG2细胞PCSK9表达的影响，为寻找新型 降血脂药物提供实验理论依据。 方法 体外培养HepG2细胞，用不同浓度的4种药物分别作用HepG2细胞24 h后， 用RT-PCR 、Western Blot分别检测PCSK9 mRNA和蛋白的表达。用MTT法检测 细胞活力的情况。筛选出可抑制PCSK9表达的药物，选择最佳药物浓度，处理 HepG2细胞0、3、6、12、24 h后，用RT-PCR 、Western Blot分别检测PCSK9 mRNA 1 万方数据 和蛋白的表达，观察其抑制作用是否存在时间依赖性。 结果 Que、UA 和Hyp 对HepG2 细胞PCSK9 mRNA 的表达没有影响，75 μmol/L 和100 μmol/L OA 组与空白对照组比较 PCSK9 mRNA 和蛋白的表达明显减 少，并呈一定的剂量依赖性（P0.05 ）。100 μmol/L OA 处理HepG2 细胞3、6、 12、24 h 后，PCSK9 mRNA 和蛋白的表达与0 h 组比较均下降，并呈一定的 时间依赖性（P0.05 ）。MTT 实验表明，OA 可抑制HepG2 细胞的活力，100 μmol/L OA 在48 h 时间点对HepG2 细胞的抑制率达50% 。 结论 OA 可下调HepG2 细胞PCSK9mRNA 和蛋白水平，且这种作用呈时间、 剂量依赖性。提示OA 降低血脂的作用可能与PCSK9 有关。 关键词 熊果酸；槲皮素；金丝桃苷；齐墩果酸；枯草溶菌素转化酶9 ；中药单体； HepG2细胞；先导化合物；筛选 2 万方数据 Effects of four Chinese medicine monomers on expression