婴儿双歧杆菌介导HSV-TKGCV对裸鼠肾癌组织细胞凋亡及p-Stat3,Bcl-xL表达的影响.docVIP

婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV对裸鼠肾癌组织细胞凋亡及p-Stat3、Bcl-xL表达的影响 任 劲，肖 啸，蒋 立，杨 柒，唐 伟 （400016 重庆，重庆医科大学附属第一医院泌尿外科） [摘要] 目的 评价婴儿双歧杆菌（BI）介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因治疗系统对裸鼠肾癌的疗效，初步探讨其诱导肾癌组织细胞凋亡及对肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL表达的影响。方法 采用肾癌786-O细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型，将模型裸鼠随机分为4组，分别经尾静脉注射生理盐水、BI、携带空质粒pGEX-5X-1的BI、携带重组质粒pGEX-TK的BI，再联合腹腔注射GCV。治疗4周结束后，称取各组裸鼠质量及荷瘤质量。TUNEL染色法检测各组肾癌组织细胞凋亡情况。免疫组化染色法检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达情况。实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测各组肾癌组织Stat3、Bcl-xL mRNA表达水平。蛋白质印记法（Western blot）检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平。结果 治疗后，重组质粒组较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组裸鼠质量增加（P0.05），荷瘤质量降低（P0.05）。TUNEL染色法显示重组质粒组凋亡指数明显高于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组（P0.01）。免疫组化染色法显示重组质粒组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达明显低于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组（P0.01）。重组质粒组肾癌组织Stat3、Bcl-xL mRNA表达水平较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显下调（P0.01）。重组质粒组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显下调（P0.01）。结论 婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统明显抑制裸鼠肾癌生长，可能通过抑制Stat3活化进而阻断Stat3信号转导通路，下调其下游抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达来诱导裸鼠肾癌组织细胞凋亡，发挥抑瘤作用。 [关键词] 婴儿双歧杆菌；HSV-TK/GCV；基因治疗；肾癌；p-Stat3；Bcl-xL [中图法分类号] [文献标志码] A Effects of bifidobacterium infantis mediated HSV-TK/GCV on renal carcinoma cells apoptosis and p-Stat3, Bcl-xL expression in nude mice Ren Jin,Xiao Xiao,Jiang Li,Yang Qi,Tang Wei （Department of Urology,First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，400016,China） Abstract Objective To evaluate the curative effect of bifidobacterium infants (BI) mediated herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK)/ganciclovir(GCV) suicide gene therapy system on renal carcinoma in nude mice and investigate the effects of BI-TK/GCV on renal carcinoma cells apoptosis and p-Stat3,Bcl-xL expression. Methods The renal carcinoma model was established by subcutaneous injection of human renal cell carcinoma cell line 786-O into nude mice. the model nude mice were randomly divided into 4 groups,respectively by tail vein injection of normal saline, BI,carrying empty plasmid BI-pGEX-5x-1,carrying recombinant plasmid BI-pGEX-TK,with intraperitoneal injection of GCV.After 4 weeks treatment,to weigh tumor w