小檗碱对HepG2细胞葡萄糖激酶活性和其基因表达影响.pdfVIP

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2017-09-10 发布于江苏
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小檗碱对HepG2细胞葡萄糖激酶活性和其基因表达影响.pdf

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华中科技大学硕士学位论文 [3] 胰高血糖素等方面亦有较好的疗效，但其作用途径和环节尚未完全明了。随着分子生物学新方法新技术的进展，人们发现葡萄糖激酶在促进肝糖原合成，促进胰岛素分泌及催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖的过程中发挥着重要的作用，改善其活性可以逆转糖尿病的某些代谢紊乱。本实验是在前期研究证实小檗碱具有促进胰岛素分泌作用的基础上，通过观察小檗碱对HepG2 细胞葡萄糖激酶活性，基因表达及其下级产物糖原含量的影响，从而探讨小檗碱是否具有葡萄糖激酶激活剂相类似的功效。 5 华中科技大学硕士学位论文材料与方法 1 材料 1.1 仪器 ELX 全自动酶标仪美国 GFD800 半自动生化分析仪中国山东 751 －紫外分光光度计美国 PH 仪器中国上海超净工作台英国电热隔水培养箱中国南通高速离心机中国北京电热恒温干燥箱中国武汉恒温循环水浴锅英国逆渗透纯水机美国超低温冰箱美国 PCR 仪美国 DYCZ-24 型垂直板电泳槽中国北京 BDF-1600 型双恒电泳仪中国北京自动凝胶图像分析仪德国 1.2 药物与试剂小檗碱中国药品生物制品研究所四甲基偶氮唑盐（MTT ）美国sigma 公司三磷酸腺苷（ATP ）武汉捷瑞生物公司氧化性辅酶Ⅱ （NADP+ ）武汉捷瑞生物公司牛血清白蛋白（BSA ）武汉捷瑞生物公司葡萄糖6 磷酸脱氢酶（G6PDH ）武汉杰辉生物公司 6 华中科技大学硕士学位论文三氯乙酸武汉杰辉生物公司蒽酮试剂武汉杰辉生物公司生物素武汉杰辉生物公司 RT-PCR 试剂武汉晶美公司提供葡萄糖激酶引物以及β-actin 引物北京奥科公司合成 2 方法 2.1 药物的配备将小檗碱充分溶解于二甲亚砜（DMSO ）中，配制成含有4mmol/L 小檗碱的二甲亚砜溶液。取此混合溶液加入到培养基中，分别配制成含有小檗碱 5、15、45 、100 μmol/L 的培养基，简称小檗碱液（Berberine,简写为 BER ）；生物素直接溶解于培养基中，配制成含 1 μmol/L 的生物素液（Biotin ，简称为BIO ）。所有液体过滤除菌后置于4℃冰箱备用。 2.2 细胞的培养、分组及药物的